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恒遠與大家分享細胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟

閱讀:996          發(fā)布時間:2014-5-14

細胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟

(一)原理:細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,須進行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

(二)細胞傳代培養(yǎng)具體操作                                            

1、細胞:貼壁細胞株

2、操作步驟

1)將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。

2)加入0.5-1ml 0.25胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。

3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1-3分鐘。

4)用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

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