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細胞培養(yǎng)時的具體步驟剖析

閱讀:1118        發(fā)布時間:2018-8-28
    細胞培養(yǎng)時的具體步驟剖析
  一、復(fù)蘇
  1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
  2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)瓶的15ml的離心管中(用培養(yǎng)瓶把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
  3.把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
  4.標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
  5.三天換一次培養(yǎng)基。
  二、傳代
  1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
  2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
  3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行),消化1-2分鐘。
  4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
  5.用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
  6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
  7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)瓶,把細胞都吹起來。
  8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
  三、凍存
  把細胞消化下來并離心。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
  凍存液的配制:70%的*培養(yǎng)基+20S+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

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