酵母雙雜交文庫技術(shù)指標(biāo)：
1、庫容量≥106；
2、文庫滴度≥107cfu/ml；
3、插入片段平均大于1kb（該數(shù)據(jù)以人類樣本構(gòu)建酵母雙雜文庫的結(jié)果為參照，如樣品物種不同，且無參考數(shù)據(jù)，則我們不作出承諾）；
4、減低高豐度表達(dá)基因10-100倍。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
A、均一化酵母雙雜cDNA文庫
總RNA提取、純化→LD PCR 合成cDNA→cDNA均一化→均一化cDNA產(chǎn)物與線性化的AD質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化于酵母感受態(tài)（真核生物同源重組修復(fù)）→所有轉(zhuǎn)化液涂于40-100塊15cm平板→計(jì)數(shù)文庫→效價→集合所有克隆得到zui終文庫。
B、普通酵母雙雜cDNA文庫
總RNA提取、純化→LD PCR 合成cDNA→cDNA產(chǎn)物與線性化的AD質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化于酵母感受態(tài)（真核生物同源重組修復(fù)）→所有轉(zhuǎn)化液涂于40-100塊15cm平板→計(jì)數(shù)文庫效價→集合所有克隆得到zui終文庫。
材料要求：
為客戶構(gòu)建的酵母雙雜交cDNA文庫，由客戶提供組織、細(xì)胞或總RNA。
服務(wù)完成時提供：
A、詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
B、該酵母文庫甘油凍存管
服務(wù)周期：獲得合格的總RNA后，45個工作日
目前我們已經(jīng)分別為*上海植物生理生態(tài)研究所、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)、浙江省農(nóng)科院、山東省農(nóng)科院等多家單位完成酵母雙雜交文庫構(gòu)建服務(wù)，物種包括人、小鼠、水稻、擬南芥、牡丹、稻飛虱等。歡迎隨時與我們！
附：酵母雙雜交原理
酵母雙雜交系統(tǒng)是目前研究蛋白-蛋白相互作用的主流方式之一，這種體外互作實(shí)驗(yàn)是在酵母這種真核細(xì)胞生物中進(jìn)行的，很大程度上模擬了研究材料的體內(nèi)環(huán)境。簡而言之，該策略就是將編碼誘餌蛋白（Bait）和靶蛋白（Target）的基因分別融合構(gòu)建于帶有酵母內(nèi)源轉(zhuǎn)錄因子基因（例如GAL4）的DNA Binding Domain序列和Activation Domain序列的兩個載體上；由于GAL4調(diào)控目標(biāo)啟動子啟動轉(zhuǎn)錄需要上述兩個結(jié)構(gòu)域空間上相互接近，即只有當(dāng)誘餌蛋白與靶蛋白存在相互作用才能使得GAL4蛋白結(jié)構(gòu)完整并啟動報(bào)告基因的表達(dá)。
報(bào)告基因一般選擇某營養(yǎng)物質(zhì)的合成基因來彌補(bǔ)營養(yǎng)缺陷型酵母宿主菌的缺陷，或者是LacZ這樣的可用于組化顯色的基因。
特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)：
酵母雙雜交系統(tǒng)的zui主要應(yīng)用是快速且直接分析已知蛋白之間的相互作用以及分離新的與已知蛋白作用的配體及其編碼它的基因。酵母雙雜交系統(tǒng)檢測蛋白之間的相互作用具有以下優(yōu)點(diǎn)：
1、相互作用的信號是在融合基因表達(dá)后，在酵母細(xì)胞內(nèi)重建完整的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)的作用而給出的，省去了純化蛋白質(zhì)的繁瑣步驟；
2、檢測在真核活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，可以在一定程度上代表研究材料細(xì)胞內(nèi)真實(shí)情況；
3、檢測的結(jié)果可以是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng)， 因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時的相互作用；
4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器官、細(xì)胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫， 能分析細(xì)胞漿、細(xì)胞核及膜結(jié)合蛋白等多種不同亞細(xì)胞部位及功能的蛋白。例如已報(bào)道成功分析了RAP1與RIF1ii、P21cip1與CDK2iii、p16與CDK4iv等之間的相互作用。本公司采用CLONTECH的BD MatchmakerTM library, 其LD-PCR策略使得所需材料的總RNA的起始濃度大大減少（1-2mg）；
5、可以用來比對病變組織，更快的找到突變基因或者導(dǎo)致變異的蛋白，更快的找到攻克方向；
6、利用研究的已知蛋白基因?yàn)檎T餌，在已經(jīng)構(gòu)建好的某組織材料特異表達(dá)的cDNA酵母AD文庫中釣取可能的互作蛋白；
7、采用Yeast mating策略，實(shí)現(xiàn)酵母AD文庫使用的反復(fù)性，在大規(guī)模高效篩選的同時縮減了研究成本
