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T4 DNA聚合酶反應(yīng)條件優(yōu)化提高一步測(cè)序和無(wú)連接酶克隆的效率

2017-11-20  閱讀(4205)

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     韓國(guó)科學(xué)家Mohammad Nazrul Islam等先前開(kāi)發(fā)了一步測(cè)序和無(wú)連接酶克?。?/span>SLIC)的方法,它簡(jiǎn)單、快速并且成本低。盡管SLIC方法通常作用效果很好,但是有時(shí)候它的克隆效率很低,可能是由于T4 DNA聚合酶室溫處理2.5min時(shí)導(dǎo)致單鏈DNA區(qū)域形成穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)。為了克服這個(gè)問(wèn)題,通過(guò)檢測(cè)較短T4 DNA聚合酶在很寬溫度范圍內(nèi)(25-75)的持續(xù)處理時(shí)間(5s-2.5min),韓國(guó)科學(xué)家Mohammad Nazrul Islam等開(kāi)發(fā)了一種改進(jìn)的熱調(diào)節(jié)SLIC方法。當(dāng)插入的同源片段小于20bp,然后用T4 DNA聚合酶在50度處理30s,這樣的克隆效率zui高。較高的溫度下,這種較短的T4聚合酶幫助增加其兩端插入強(qiáng)二級(jí)結(jié)構(gòu)的DNA的克隆效率,增加短片段克隆的SLIC的效率。

原文:

Optimizing T4 DNA polymerase conditions enhances the efficiency of one-step sequence- and ligation-independent cloning. Mohammad Nazrul Islam, Kyeong Won Lee, Hyung-SoonYim et al. BioTechniques 63:125-130 (September 2017).

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