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酶聯(lián)免疫吸附法

2021-8-4  閱讀(2582)

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 原理:可用于測(cè)定抗體,也可用于檢測(cè)杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反響將待測(cè)物與酶連接,然后通過(guò)酶與底物發(fā)生顏色反響,用于定量測(cè)定。酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定的對(duì)象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑: 

固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); 

酶符號(hào)的抗原或抗體(符號(hào)物); 
酶效果的底物(顯色劑)。

ELISA進(jìn)程包括:抗原吸附在固相載體上,這個(gè)進(jìn)程稱為包被,加待測(cè)抗體, 再加相應(yīng)酶符號(hào)抗體,生成抗原--待測(cè)抗體--酶符號(hào)抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品。借助分光光度計(jì)的光吸收核算抗體的量。

依據(jù)檢測(cè)意圖和操作過(guò)程不同,有以下三種類(lèi)型的常用辦法:

a、間接法  

此法是測(cè)定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。洗刷后,加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體(酶標(biāo)抗抗體)和底物進(jìn)行測(cè)定。

b、雙抗體夾心法  

酶聯(lián)免疫吸附法此法常用于測(cè)定抗原。將已知抗體吸附于固相載體,加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合。溫育后洗刷,加人酶標(biāo)板中。

c、競(jìng)爭(zhēng)法  

此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定,也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體。參加待測(cè)抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原,使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合;通過(guò)洗刷分離,zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。

 

 


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