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1.免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。

2.骨髓瘤細胞的培養(yǎng)與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細胞發(fā)生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處于對數(shù)生長期。

3.細胞融合的關(guān)鍵:

1）技術(shù)上的誤差常常導致融合的失敗。例如，供者淋巴細胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。

2）融合試驗zui大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù)。

3）陽性克隆的篩選 應(yīng)盡早進行。通常在融合后10天作*次檢測，過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測方法應(yīng)靈敏、準確、而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法zui簡便，RIA法zui準確。陽性克隆的篩選應(yīng)進行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。

4） 克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進行并反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細胞株。