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技術(shù)解析腫瘤壞死因子的檢測(cè)方法

閱讀:1933          發(fā)布時(shí)間:2014-5-15

 技術(shù)員根據(jù)腫瘤壞死因子的實(shí)驗(yàn),揭示了腫瘤壞死因子(tunlornecrosisfactor,TNF)有α和β兩種類型,后者亦稱淋巴毒素(lymphotoxin,LT),雖然產(chǎn)生的細(xì)胞類型不盡相同,但能與相同的受體結(jié)合,故二者的生物學(xué)活性極其相似;此外,二者又有膜結(jié)合型與分泌型兩種形式。
TNF-α與β在體內(nèi)、外均可對(duì)一些腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞系起殺傷作用,而對(duì)體外培養(yǎng)的多種正常細(xì)胞則無細(xì)胞毒效應(yīng)。根據(jù)這一特點(diǎn),可利用對(duì)TNF敏感的靶細(xì)胞測(cè)定TNF活性。zui常用的方法是檢測(cè)TNF對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞株L929或L-M細(xì)胞的細(xì)胞毒活性,細(xì)胞死亡率與TNF活性成正比。并可用特異性中和抗體來區(qū)別TNF-α與TNF-β。檢測(cè)細(xì)胞毒活性可用51Cr釋放法或染料染色方法。

利用抗原—抗體反應(yīng)檢測(cè)TNF,可采用RIA、ELISA、間接免疫熒光法及免疫組化法。RIA及ELISA可用于待檢樣品的定量,現(xiàn)已有國(guó)產(chǎn)的TNF ELISA試劑盒出售,方法簡(jiǎn)便、敏感且特異。而間接免疫熒光法及免疫組化法可用于對(duì)TNF的組織定位或觀察TNF在細(xì)胞內(nèi)及胞膜的定位。
TNF-α分為跨膜型及分泌型,前者分子量為26kD,而后者則為17kD??山柚鶶DS-PAGE電泳,將蛋白按分子量大小分開,再用免疫印跡技術(shù)特異性地顯示兩種類型的TNF-a。

根據(jù)技術(shù)員對(duì)腫瘤壞死因子的實(shí)驗(yàn)分析,我們?yōu)槟峁┠[瘤壞死因子試劑盒,種屬多類,咨詢?;虻卿浽诰€留言。

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