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分子生物學實驗室區(qū)域的劃分

閱讀:2021        發(fā)布時間:2021-1-29

一、核酸檢測實驗室應劃分為五個獨立的工作區(qū)。五個工作區(qū)應按照從清潔、半污染到污染的順序排列。各區(qū)內的試劑和耗材不能再進入任何“上游”區(qū)域。

(1)試劑配置和貯存區(qū):本區(qū)的功能是實驗相關試劑(如核算提取液、乙醇等)的配置和貯存(包括商業(yè)化的試劑,如PCR反應緩沖液、Taq聚合酶和dNTPs等)。用于PCR擴增的試劑建議分裝后保存。

(2)樣品制備區(qū):本區(qū)的功能為待檢樣品的保存、核酸的提取、貯存等。進行RNA檢測的實驗室,在此區(qū)域內應辟出專門的RNA操作區(qū),或安裝一臺Ⅱ級生物安全柜或外排風式的排風櫥來替代。

(3)PCR反應配制區(qū):本區(qū)的功能為配制、分裝PCR主反應混合液以及加入核酸模板。對于使用巢式PCR進行檢測的實驗室,建議在此區(qū)安裝一臺Ⅱ級生物安全柜或外排風式的排風櫥,,頭一輪的擴增產物添加至第二輪的主反應混合液的操作可在此區(qū)進行。

(4)擴增區(qū):核酸擴增。加了DNA或RNA等模板的反應管應蓋好管蓋后才拿到本區(qū)。

(5)擴增產物分析區(qū):本區(qū)的功能為擴增片段的測定。本區(qū)是主要的擴增產物污染來源,應注意避免通過本區(qū)的物品將擴增產物帶出。對于使用定量PCR進行檢測的實驗室,此產物分析區(qū)可以省略。

二、以上各區(qū)域擁有明確的標記。進入各工作區(qū)域應盡量按單一方向進行,即試劑配制和貯存區(qū)、樣品制備區(qū)、PCR反應配制區(qū)、擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)。

三、每個工作區(qū)域內都應有專項使用的設備,包括加樣設備,如移液器、吸頭等。適當時,可以用顏色或其他方式對不同區(qū)域內的實驗用品加以區(qū)分,并避免不同工作區(qū)域內的設備和實驗用品混用。

四、適宜時,實驗室內可配置便攜式紫外消毒裝置,用于各工作區(qū)域內的實驗表面、臺面、地面等的紫外消毒。

五、定期對擴增產物分析用1mol/L的鹽酸擦拭臺面,以防擴增產物的污染。用過的電泳凝膠和電泳緩沖液要集中處理。

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