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迪圖講解熒光定量PCR儀的關(guān)鍵參數(shù)和重要特性

閱讀:2031        發(fā)布時(shí)間:2021-4-9

熒光定量PCR儀的關(guān)鍵參數(shù)和重要特性  在選購(gòu)熒光定量PCR儀時(shí),幾個(gè)關(guān)鍵參數(shù)要注意:
   1.儀器的檢測(cè)通量(Throughput)
    首先要考慮實(shí)驗(yàn)室目前需要使用定量PCR儀的頻率。加州大學(xué)舊金山分校癌癥中心的基因組分析設(shè)備負(fù)責(zé)人David Ginzinger檢測(cè)過(guò)市面上絕大多數(shù)的定量PCR儀。他表示,如果不是大規(guī)模批量使用,比如說(shuō)主要是用來(lái)檢測(cè)驗(yàn)已知基因,那確實(shí)不需要昂貴的產(chǎn)品。但是如果是那些需要尋找新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室,就需要能容納384孔板、運(yùn)行時(shí)間更快的儀器。不過(guò)僅有這么一件高通量的儀器是不夠快的,你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品制備成為限速的瓶頸。所以高通量的實(shí)驗(yàn)室往往需要進(jìn)一步的自動(dòng)化儀器,只要“按一下鈕”,儀器就會(huì)自動(dòng)處理樣品、純化核酸和制備PCR模板。
 
   2.多重?cái)U(kuò)增的能力 
    多重?cái)U(kuò)增越來(lái)越熱。實(shí)時(shí)定量PCR儀也不能幸免。定量PCR儀擁有多個(gè)檢測(cè)通道,因而儀器就可以檢測(cè)同一個(gè)樣品槽里多個(gè)模板的擴(kuò)增過(guò)程。新的LightCycler2.0 有6個(gè)檢測(cè)通道,比原來(lái)多了3個(gè)。SmartCyclerⅡ有4個(gè)檢測(cè)通道。以文庫(kù)產(chǎn)品而名滿(mǎn)天下的Stratagene也有一種價(jià)格不到Roche的一半、口碑不錯(cuò)的定量PCR儀Mx3000P,也就是4個(gè)檢測(cè)通道。不過(guò)多重?cái)U(kuò)增并非人人適用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。
 
  3.軟件 
     當(dāng)你準(zhǔn)備選擇一臺(tái)定量PCR儀,你必須要檢測(cè)附帶的軟件。使用方便嗎,是否可以進(jìn)行你所需要的分析,輸出格式有幾種。不過(guò),你需要留意,太容易使用的軟件是不是功能比較簡(jiǎn)單而無(wú)法進(jìn)行復(fù)雜計(jì)算,以前的軟件還需要你做進(jìn)一步分析,新的軟件已經(jīng)可以處理一切了。除了基本功能,部分軟件還可以有更多的功能,比如引物和探針設(shè)計(jì)、多重分析設(shè)計(jì)、背景校正、數(shù)據(jù)歸一化等等。Roche應(yīng)用科學(xué)部的應(yīng)用和技術(shù)服務(wù)部負(fù)責(zé)人Willian Demyan 就強(qiáng)調(diào):定量PCR是一個(gè)幾何擴(kuò)增的過(guò)程,開(kāi)始時(shí)一個(gè)拷貝之差,結(jié)果就有幾何數(shù)量級(jí)之別。
 
    4.靈活性 
    大規(guī)模繁忙的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備*固然令人羨慕,常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室同樣可以有精彩的選擇。現(xiàn)在的供應(yīng)商都擁有眾多的技術(shù)專(zhuān)家,不單了解你的目前需要,還非常周到地為你考慮了以后可能的需求變化,比如提供多種可升級(jí)配件和模塊。BioRad的MyCycler就可以選擇模塊而升級(jí)為實(shí)時(shí)定量。ABI的定量PCR儀有多種不同的樣品槽,可以將96孔槽變?yōu)殡p384孔槽而滿(mǎn)足部分高通量的需求。對(duì)于剛開(kāi)始小量做qPCR的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō),SmartCyclerⅡ定量PCR儀是一個(gè)好選擇,一個(gè)基本模塊有16個(gè)獨(dú)立控溫樣品槽,可以同時(shí)或者前后分別進(jìn)行16個(gè)*獨(dú)立的不同實(shí)驗(yàn), “隨機(jī)存取”;當(dāng)實(shí)驗(yàn)室需要較大規(guī)模實(shí)驗(yàn)時(shí),可以非常經(jīng)濟(jì)地升級(jí),從1個(gè)增加到6個(gè)基本模塊,也就是96樣品孔。雖然不能用96孔板,但是當(dāng)一個(gè)學(xué)生開(kāi)始小量實(shí)驗(yàn),其他人還可以隨時(shí)插進(jìn)去開(kāi)始自己的獨(dú)立實(shí)驗(yàn),而且互不干擾,就是增加了靈活性。對(duì)于剛開(kāi)始只做少量實(shí)驗(yàn)而且預(yù)算較緊張的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)是非常靈活的選擇。

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