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免疫酶標(biāo)技術(shù)
1） 直接法
1．標(biāo)本固定。
2．PBS洗滌2×3分鐘。
3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘。
4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。
5．滴加酶標(biāo)記的抗體37℃1小時(shí)或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結(jié)果。DAB＋H2O2應(yīng)用前15分鐘配制。
8．充分水洗后，復(fù)染、脫水、透明、封片、鏡檢。
2） 間接法
1．標(biāo)本固定。
2．PBS洗滌2×3分鐘。
3．1％H2O2（或1％H2O2 甲醇）抑制內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘。
4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。
5．滴加第一抗體，37℃1小時(shí)或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．滴加酶標(biāo)二抗，室溫1小時(shí)。
8．PBS洗滌3×3分鐘。
9．0.04％DAB＋0.03 ％H2O2顯色5～10分鐘。
10． 充分水洗后，復(fù)染、脫水、透明、封片、鏡檢。
3） PAP法（過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復(fù)合物法）
1．標(biāo)定固定后，PBS洗滌。
2．1％H2O2（或1％H2O2 甲醇）阻斷內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘。
3．PBS洗滌2×3分鐘。
4．正常血清（二抗的正常血清）孵育，室溫20分鐘。
5．滴加一抗，室溫1小時(shí)或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．滴加二抗，室溫30分鐘。
8．PBS洗滌3×3分鐘。
9．加PAP復(fù)合物，室溫60分鐘。
10． PBS洗滌3×3分鐘。
11． 0.04％DAB＋0.03％ H2O2顯色5～10分鐘。
12． 充分水洗。
13． 蘇木精復(fù)染，封片觀察。
4） 雙PAP法
1～10同單PAP法。
11． 二次加酶標(biāo)二抗。
12． PBS洗。
13． 二次加PAP。
14． PBS洗。
15． 0.04％DAB＋0.03 ％H2O2顯色5～10分鐘。
16． 蘇木精復(fù)染核，封片，鏡檢。
5） ABC法（卵白素－生物素－過氧化物酶復(fù)合物法）
1～8同PAP法
9）加ABC液，室溫60分鐘。
10） PBS洗。
11） 0.04％DAB＋0.03％ H2O2顯色5～10分鐘。
12） 充分水洗。
13） 蘇木精復(fù)染核，封片，鏡檢。