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中級(jí)會(huì)員 | 第22年

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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證基因功能

時(shí)間:2023/6/21閱讀:1007
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一、實(shí)驗(yàn)材料: 疾病對(duì)應(yīng)的細(xì)胞系(或者是原代細(xì)胞),預(yù)算充足情況下可以選擇2種細(xì)胞系,暫定為:A和B細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)方案:敲低兩種細(xì)胞的目的基因1、過表達(dá)兩種細(xì)胞的目的基因1(若是miRNA可以使用mimics、inhibitor)
三、干擾片段篩選2種細(xì)胞都需要篩選(當(dāng)用mimics和inhibitor時(shí)也需要初步篩選表達(dá)效果)
目的基因1干擾片段篩選:針對(duì)目的基因1設(shè)計(jì)并合成3條siRNA及NC,轉(zhuǎn)染細(xì)胞,QPCR篩選出干擾 的片段進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn); 
四、實(shí)驗(yàn)分組:A或B細(xì)胞

  • A

  • A+siRNA NC對(duì)照組

  • A+siRNA目的基因1干擾

  • A+過表達(dá)目標(biāo)基因1 

  • A+過表達(dá)空載

  • 抑制劑處理濃度1

五、檢測(cè)項(xiàng)目:

  • 細(xì)胞增殖或者細(xì)胞毒性檢測(cè)(CCK法/MMT),

  • 流式檢測(cè)細(xì)胞周期,

  • 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡,

  • 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(transwell),遷移、劃痕

  • WB檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)變化,

  • QPCR檢測(cè)信號(hào)通路中基因的表達(dá), 

  • 免疫熒光檢測(cè)下游信號(hào)通路蛋白

  • 流式多色檢測(cè)某些marker指標(biāo)

  • Coip檢測(cè)A和B蛋白是否結(jié)合

  • 雙熒光素酶檢測(cè)A和B是否結(jié)合

  • 油紅O染色

  • 生化檢測(cè):SOD,CAT等

  • 透射電鏡

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