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上海寶葉生物科技有限公司

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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì) 寶葉生物

2012-6-14  閱讀(1995)

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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)
本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),使用方便,效果尤佳。其分子量范圍是14400~97400道爾頓。
成分:


成分
分子量(道爾頓)
含量(μg/支)
兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B
97400
40
牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin
66200
40
兔肌動(dòng)蛋白/Rabbit actin
43000
40
牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase
31000
40
胰蛋白酶抑制劑/Trypsin inhibitor
20100
40
雞蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme
14400
40


本產(chǎn)品規(guī)格:凍干粉(20次/支)
使用方法:
1、 將凍干粉產(chǎn)品先加200ul重蒸水溶解,再加等體積的2倍樣品緩沖液混勻。在沸水浴中變性3-5分鐘,分裝20ul/支,入-20℃保存。使用時(shí)取一支即可上樣。
2、 應(yīng)經(jīng)常規(guī)SDS-PAGE電泳后,用考馬斯亮藍(lán)R-250或G-250(coomassie blue R-250 or G250)染色??傻梅植季鶆?、密度相同的6個(gè)蛋白質(zhì)條帶
3、 銀染法:將本品以1倍樣品緩沖液稀釋40-50倍后分裝(8ul/支)、-20℃保存。使用前取一支,100℃水浴3-5分鐘即可上樣。經(jīng)常規(guī)SDS-PAGE后銀染,可得分布均勻的6個(gè)蛋白質(zhì)條帶。
建議使用分離膠:14%(T)。
-2倍樣品緩沖液配制:


試劑名稱
成分
含量/濃度
配制方法
2倍樣品
緩沖液
0.5M Tris-HCI,PH6.8
2.0ml
以上溶液混合后加雙蒸水2.5ml至10.0ml,可適當(dāng)調(diào)整溴酚藍(lán)的用量以保證電泳時(shí)的*指示
丙三醇(甘油)
2.0ml
20%SDS
2.0ml
0.1%(w/v)溴酚藍(lán)
0.5ml
2-b-巰基乙醇
1.0ml


Reagents for SDS Gels
A.      4×Lower gel buffer pH8.8
1.5M Tris         90.83g
0.4%(w/v)SDS     2.00g
dd H2O to 500ml
用濃HC1調(diào)PH至8.8
B.      4×Upper gel buffer pH6.8
0.5M Tris        12.11g
0.4%(w/v)SDS    0.8g
dd H2O to 200ml
用濃HC1調(diào)PH至6.8
C.      30% Acrylamide regular
29.2%(w/v)acrylamide     29.2g
0.8%(w/v)Bis-acrylamide   0.8g
dd H2O to 100ml
加熱使acrylamide*溶解,冷卻后加Bis混合溶解后定容,用濾紙過(guò)濾,裝棕色瓶
D.     10×Running buffer
0.25M Tris              30.3g
1.92M Gly              144.1g
1.0%(w/v)SDS         10.0g
dd H2O to 100ml
(無(wú)需調(diào)PH)PH即為8.2-8.3
分離膠 總體積12ml   單位:ml                                濃縮膠
5%
7%
10%
11.5%
12%
13.5%
14%
15%
5%
dd H2O
7
6.2
5
4.4
4.2
3.6
3.4
3
dd H2O
4.06
4×lower
3
3
3
3
3
3
3
3
4×Up
1.68
30%Acr
2
2.8
4
4.6
4.8
5.4
5.6
6
30%Acr
1
100%TEMED
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
100%TEMED
5ul
10%AP
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
10%AP
50ul
附圖一:SDS-PAGE 低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)R-250染色結(jié)果
兔磷酸化酶B            97400道爾頓
牛血清白蛋白            66200道爾頓
兔肌動(dòng)蛋白              43000道爾頓
牛碳酸酐                31000道爾頓
胰蛋白酶抑制劑          20100道爾頓
雞蛋清溶菌              14400道爾頓


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