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上海寶葉生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·6年
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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)
本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，使用方便，效果尤佳。其分子量范圍是14400～97400道爾頓。
成分：
成分 | 分子量（道爾頓） | 含量（μg/支） |
兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B | 97400 | 40 |
牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin | 66200 | 40 |
兔肌動(dòng)蛋白/Rabbit actin | 43000 | 40 |
牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase | 31000 | 40 |
胰蛋白酶抑制劑/Trypsin inhibitor | 20100 | 40 |
雞蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme | 14400 | 40 |
本產(chǎn)品規(guī)格：凍干粉（20次/支）
使用方法：
1、 將凍干粉產(chǎn)品先加200ul重蒸水溶解，再加等體積的2倍樣品緩沖液混勻。在沸水浴中變性3-5分鐘，分裝20ul/支，入-20℃保存。使用時(shí)取一支即可上樣。
2、 應(yīng)經(jīng)常規(guī)SDS-PAGE電泳后，用考馬斯亮藍(lán)R-250或G-250（coomassie blue R-250 or G250）染色?？傻梅植季鶆颉⒚芏认嗤?個(gè)蛋白質(zhì)條帶
3、 銀染法：將本品以1倍樣品緩沖液稀釋40-50倍后分裝（8ul/支）、-20℃保存。使用前取一支，100℃水浴3-5分鐘即可上樣。經(jīng)常規(guī)SDS-PAGE后銀染，可得分布均勻的6個(gè)蛋白質(zhì)條帶。
建議使用分離膠：14%（T）。
表-2倍樣品緩沖液配制：
試劑名稱 | 成分 | 含量/濃度 | 配制方法 |
2倍樣品 緩沖液 | 0.5M Tris-HCI,PH6.8 | 2.0ml | 以上溶液混合后加雙蒸水2.5ml至10.0ml，可適當(dāng)調(diào)整溴酚藍(lán)的用量以保證電泳時(shí)的*指示 |
丙三醇（甘油） | 2.0ml | ||
20%SDS | 2.0ml | ||
0.1%（w/v）溴酚藍(lán) | 0.5ml | ||
2-b-巰基乙醇 | 1.0ml |
Reagents for SDS Gels
A. 4×Lower gel buffer pH8.8
1.5M Tris 90.83g
0.4%（w/v）SDS 2.00g
dd H2O to 500ml
用濃HC1調(diào)PH至8.8
B. 4×Upper gel buffer pH6.8
0.5M Tris 12.11g
0.4%（w/v）SDS 0.8g
dd H2O to 200ml
用濃HC1調(diào)PH至6.8
C. 30% Acrylamide regular
29.2%（w/v）acrylamide 29.2g
0.8%（w/v）Bis-acrylamide 0.8g
dd H2O to 100ml
加熱使acrylamide*溶解，冷卻后加Bis混合溶解后定容，用濾紙過濾，裝棕色瓶
D. 10×Running buffer
0.25M Tris 30.3g
1.92M Gly 144.1g
1.0%（w/v）SDS 10.0g
dd H2O to 100ml
（無需調(diào)PH）PH即為8.2-8.3
分離膠 總體積12ml 單位：ml 濃縮膠
5% | 7% | 10% | 11.5% | 12% | 13.5% | 14% | 15% | 5% | ||
dd H2O | 7 | 6.2 | 5 | 4.4 | 4.2 | 3.6 | 3.4 | 3 | dd H2O | 4.06 |
4×lower | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 4×Up | 1.68 |
30%Acr | 2 | 2.8 | 4 | 4.6 | 4.8 | 5.4 | 5.6 | 6 | 30%Acr | 1 |
100%TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 100%TEMED | 5ul |
10%AP | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 10%AP | 50ul |
附圖一：SDS-PAGE 低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)R-250染色結(jié)果
兔磷酸化酶B 97400道爾頓
牛血清白蛋白 66200道爾頓
兔肌動(dòng)蛋白 43000道爾頓
牛碳酸酐 31000道爾頓
胰蛋白酶抑制劑 20100道爾頓
雞蛋清溶菌 14400道爾頓
