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重組質(zhì)體的限制酶分析

2012-7-16  閱讀(1419)

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    儀器用具:
    微量離心機
    冰浴
    Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器
    UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)
    防護面罩
 
    藥品試劑:
    限制酶:BamHI, HindIII (20 U/μL, BioLabs)
    10×NE Buffer BamHI (0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol)
    100×BSA (10 mg/mL bovine serum albumin) 使用前稀釋十倍成10×無菌水
 
    方法步驟:
    1) 正反應(yīng)株,接種于3 mL LB/Amp 培養(yǎng)基,于37℃震蕩培養(yǎng)過夜后,以2.1 的方法抽取質(zhì)體。
    2) 每一株每反應(yīng)各取3 μL 質(zhì)體,另取pQE31 及pBlueGus 每反應(yīng)各3 μL,分別依下表進行HindIII 及BamHI 切割。
    3) 以1% agarose gel 進行電泳分析,由電泳圖譜挑選帶有gus DNA 片段的重組質(zhì)體。
??  照相后的電泳膠片不要丟掉,可繼續(xù)進行Southern 轉(zhuǎn)印。
    限制酶分析請依照下列表格加入:
     # 各管置請于37℃反應(yīng)至少1 h。

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