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上海寶葉生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·6年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 公司動(dòng)態(tài)> 電感受態(tài)大腸桿菌TGl的制備
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[方法]
1．將大腸桿菌TG1種到基本培養(yǎng)瓊脂板，37℃過(guò)夜。
2．將基本培養(yǎng)瓊脂板上的大腸桿菌TGl再接種到含有15m1 2XTY培養(yǎng)基的100ml形瓶中。37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。
3．用5ml夜培養(yǎng)的TGl接種到兩個(gè)含500m1 2×Y培養(yǎng)基的2L有擋板錐形瓶中。在搖床中培養(yǎng)約1．5小時(shí)，直到A600接近0．5。
4．將菌液轉(zhuǎn)移4個(gè)預(yù)冷離心瓶中（約250ml/瓶）。平衡后，置于冰上20分鐘。
5．以3000g，4℃離心15分鐘。使用前預(yù)冷所有轉(zhuǎn)頭。
6，棄去上清，并以起始體積的冰冷lmmol/L Hepes溶液（約250m1）重懸每個(gè)錐形瓶中的細(xì)胞。所有溶液都應(yīng)當(dāng)新鮮配置。
7．再次以3000g，4℃離心15分鐘。
8．以一半起始體積的冰冷lmmol/L Hepes溶液（約125ml）重懸每個(gè)錐形瓶中的細(xì)胞；此時(shí)可合并到兩個(gè)離心瓶中。
9．再次以3000g，4℃離心15分鐘。
10．以總體積為20m1的10%甘油和lmm01/L Hepes混合液重懸所有細(xì)胞。
11．再次以3000g，4℃離心15分鐘。
12．如果細(xì)胞不是新鮮使用而是儲(chǔ)存，則需準(zhǔn)備乙醇/干冰浴。
13．以總體積為2m1的10%甘油重懸細(xì)胞。
14．使用新鮮制備的細(xì)胞，或者用干冰浴等量分裝凍存細(xì)胞②。在檢測(cè)效率后，及時(shí)使用細(xì)胞（在1周內(nèi)）。
用于電轉(zhuǎn)化的DNA不得含有鹽分。細(xì)菌/DNA混合物中如有鹽分可導(dǎo)致電?。ㄒ环N短路）的形成，應(yīng)加以避免?？傮w上，在70℃10分鐘的熱滅活步驟后，可使用2/Il標(biāo)準(zhǔn)連接液進(jìn)行連接。為構(gòu)建抗體文庫(kù)，所用DNA必須使用酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀法或選擇合適的試劑盒（例如Geneclean或Qiagen）進(jìn)行純化。
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