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ELISA（雙抗體夾心法）—檢測HBsAg
【摘要】：以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。 【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含: 1、包被抗-HBs反應(yīng)條 1瓶 2、酶結(jié)合物 1瓶 3、HBsAg陽性對照 1瓶 4、HBsAg陰性對照 1瓶 5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋 1瓶 6、顯色劑（
相關(guān)專題 ELISA免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù) 以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。

【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含:

1、包被抗-HBs反應(yīng)條

1瓶

2、酶結(jié)合物

1瓶

3、HBSAg陽性對照

1瓶

4、HBsAg陰性對照

1瓶

5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋

1瓶

6、顯色劑(TMB)A

1瓶

7、顯色劑(TMB)B

1瓶

8、終止液

1瓶

【方法】

1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。

2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干。

3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。

4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。

【結(jié)果】

比色法:波長450nm，先用空白孔校零點(diǎn)，然后讀取各孔光密度值。

樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。

備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。陽性對照OD值≥0.8，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

【注意事項(xiàng)】

1、試劑盒置2℃～8℃保存。

2、使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。

3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。

4、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。

5、不同批號試劑請勿通用。

6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。

7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時(shí)，請置37℃至溶解。