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技術(shù)文章

ELISA試劑盒加樣品解決方法

閱讀:276          發(fā)布時(shí)間:2014-7-11

ELISA試劑盒加樣品解決方法

    近日山中伸彌領(lǐng)導(dǎo)的研究小組在的研究中對人類轉(zhuǎn)錄因子庫進(jìn)行了高通量篩選,從中鑒別出了一種新型轉(zhuǎn)錄因子Glis1,用Glis1取代c-Myc,與Oct3/4, Sox2, Klf4一起誘導(dǎo)小鼠和人類成纖維細(xì)胞重編程為iPS細(xì)胞。并證實(shí)相比于c-Myc,Glis1誘導(dǎo)生成的iPS細(xì)胞具有較低的致癌性。這些iPS細(xì)胞形態(tài)與胚胎干細(xì)胞(ES)極為相似,且可表達(dá)與ES細(xì)胞相似的標(biāo)記基因。當(dāng)研究人員證實(shí)移植到裸鼠中的這些iPS細(xì)胞形成了畸胎瘤。在隨后的實(shí)驗(yàn)中,研究人員證實(shí)Glis1高表達(dá)于未受精的卵母細(xì)胞和胚胎單細(xì)胞中。DNA芯片分析結(jié)果顯示Glis1對細(xì)胞內(nèi)多種促重編程信號通路包括Myc, Nanog, Lin28, Wnt, Essrb以及間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化起推動(dòng)作用。

1、ELISA試劑盒樣品數(shù)量不一,加樣時(shí)間長短不一
解決方法: 重復(fù)某一樣品時(shí),加樣時(shí)間盡可能與*次接近
2、加入后未混勻
 加樣后在混勻器上充分混勻
3、酶標(biāo)儀濾光片不對或輸入波長不對
解決方法:TMB顯色用450/630波長
4、酶標(biāo)儀測定重復(fù)性差
解決方法:校對酶標(biāo)儀
5、洗滌不正確
解決方法:洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時(shí)反應(yīng)板面向下,垂直用力甩凈內(nèi)容物(可多甩幾次),在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機(jī)洗板時(shí)不應(yīng)有堵孔,洗滌應(yīng)充分 
6、溫育條件不一致(一次用水育,一次用恒溫箱) 
解決方法:恒溫箱溫育較水浴顯色深, OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃ 
7、不慎多加或少加酶或顯色劑 
解決方法:多加時(shí)顯色深,少加則淺,用記號筆圈上,便于分析 
8、閾值附近時(shí)陰時(shí)陽 

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