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ELISA試劑盒使間接法的試劑本底加深
閱讀：225 發(fā)布時間：2014-7-30 ELISA試劑盒抗凝不*的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
1.血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下。
2.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。
3.吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準確。
4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶，如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。1．5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
5.液體全部加入酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
6.孵育時要使蓋板膜封好酶標板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。
7.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有ELISA試劑盒與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只要取出所需量。
8.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA試劑盒測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色
9.手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
10.檢測吸光度前應(yīng)將酶標儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
12.孵育的時間應(yīng)該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。
13.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
14.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標本的混勻亦應(yīng)注意，不要進行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
15.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
16.沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
17.標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。標本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合。超過一周測定的需－20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。