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技術(shù)文章

ELISA試驗中注意的細節(jié)

閱讀:144          發(fā)布時間:2015-3-12

1.不管是ELISA試劑盒,還是其它產(chǎn)品,在使用之前我們都要仔細閱讀說明書。

2.同樣的,一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。

3.按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。

4.標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存。

5.ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應(yīng)包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。

6.標準品的配制:對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復溶。

7.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

8.根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量。

9.按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑,DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。

10.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。

11.為了優(yōu)化靈敏度,建議過*孵育標準品和標本。

12.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

13.當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。

14.準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等。

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