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CHO細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明

時(shí)間:2016-1-6閱讀:6694

                      CHO細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明

產(chǎn)品名稱:CHO細(xì)胞

中文名稱:中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary)

種屬:倉(cāng)鼠

組織來(lái)源 卵巢

生長(zhǎng)狀態(tài) 貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài) 上皮樣

CHO細(xì)胞具有不死性,可以傳代百代以上

CHO細(xì)胞培養(yǎng)

1、培養(yǎng)條件:

培養(yǎng)基類型:DMEM(Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

FBS(GIBCO 16000-044): 10%

抗生素:雙抗

培養(yǎng)條件:37℃,CO2: 5%

2、傳代方法:

收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài):

如果沒(méi)長(zhǎng)滿,將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(約80%-90%)則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代方法:

1 )棄去培養(yǎng)基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 )加1ml 0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi),隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化,待細(xì)胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

懸浮細(xì)胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。

1)直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

2)離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi), 1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

 一般沒(méi)有特殊說(shuō)明,細(xì)胞一般是一傳二。

3、凍存方法:

70% *培養(yǎng)基,20%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲(chǔ)存:液氮中長(zhǎng)期保存。

4、注意事項(xiàng)

1 )觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察,便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。

2 )在運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 )收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等,請(qǐng)拍照并在一周內(nèi)與我們。

 

來(lái)源:慧穎細(xì)胞庫(kù) 整理編輯

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