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聯(lián)會復(fù)合體的染色與觀察
點擊次數(shù)：2378 發(fā)布時間：2017-5-9
實 驗 目 的
1. 學(xué)習(xí)光學(xué)顯微鏡下顯示聯(lián)會復(fù)合體的實驗技術(shù)
2. 觀察光鏡下聯(lián)會復(fù)合體的形態(tài)結(jié)構(gòu)
實 驗 原 理
聯(lián)會復(fù)合體是減數(shù)分裂前期同源染色體配對形成的非*性核內(nèi)特殊結(jié)構(gòu)，典型的聯(lián)會復(fù)合體由三股平行的線狀結(jié)構(gòu)組成，即兩條平行側(cè)線和一條纖細的中央軸組成。一般開始于偶線期，成熟于粗線期，消失于雙線期。它與減數(shù)分裂三個重要環(huán)節(jié)同源染色體聯(lián)會、交換以及分離有著密切關(guān)系。大量工作表明，聯(lián)會復(fù)合體在真核生物的減數(shù)分裂過程中是普遍存在的。
實 驗 用 品
一、材料 雄性小白鼠
二、器材
離心機、顯微鏡、水浴、培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、吸管、燒杯、量筒、離心管(10ml)、酒精燈。
三、試劑 (所用試劑均為AR級)
1、0.7%檸檬酸鈉(檸檬酸三鈉)溶液。
2、3%中性福爾馬林(甲醛溶液):甲醛8.3ml，醋酸鈉() 1.1g，加蒸餾水91.7ml。
3、50%硝酸銀溶液
4、明膠顯影液: 稱取2g明膠(gelatin)粉末溶解于99ml蒸餾水中，加1ml甲酸。
5、甲醇-冰醋酸
實 驗 方 法
脫頸處死動物取睪丸
↓
放2ml 0.7%檸檬酸鈉培養(yǎng)皿中
↓
釋放曲細精管內(nèi)容物(剪開白膜，用解剖針和小彎鑷挾出曲細精管并剪碎，用吸管輕輕吹打)
↓移至刻度離心管中
加8ml 0.7%檸檬酸鈉溶液制成細胞懸液
↓
室溫下低滲45~60min
↓
低滲終止*min，加3%中性甲醛溶液0.3ml，至zui終濃度為0.1%，混勻
↓
常規(guī)離心(1000r/min)
↓棄上清
甲醇和冰醋酸(3:1)混合液固定
↓
空氣干燥法制片(關(guān)鍵是長時間的低滲液處理和添加福爾馬林溶液)
↓
銀染
[附] 銀染方法
(1)在培養(yǎng)皿底部放一用少量蒸餾水潤濕的濾紙，上放2根小玻棒(或竹桿)，置水浴內(nèi)保溫(80℃)。(2)玻片標(biāo)本細胞面朝上平放其上，加4滴50%硝酸銀溶液和2滴明膠顯影液，復(fù)以蓋玻片(或擦鏡紙)，直到玻片標(biāo)本呈金褐色為止，一般為3-4min。(3)移除蓋片，并用蒸餾水快速漂洗，晾干。(4)觀察或攝影，分析。
實 驗 結(jié) 果
銀染后的聯(lián)會復(fù)合體呈金黃或黃褐色，兩條同源染色體聯(lián)會較緊，但端部仍可見聯(lián)會復(fù)合體結(jié)構(gòu)的雙股性?？梢奩染色體的大部分和X染色體的一部分局部配對，形成短而清晰的聯(lián)會復(fù)合體。