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上海士鋒生物科技有限公司

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上海士鋒生物關(guān)于新型熒光蛋白R(shí)SFP新進(jìn)展的介紹

點(diǎn)擊次數(shù):1765 發(fā)布時(shí)間:2013-6-5

近年來,隨著新型熒光探針和成像方法的改進(jìn),光學(xué)成像的分辨率得到了極大的改進(jìn)。但是可逆光轉(zhuǎn)化熒光蛋白RSFP的發(fā)展較為滯后,品種極其單一。近日來自中科院生物物理研究所,北京大學(xué)等處的研究人員,通過一種光轉(zhuǎn)化熒光蛋白mEos2的隨機(jī)突變,獲得了一系列具有光開關(guān)功能的綠色熒光蛋白,這將有助于推動(dòng)現(xiàn)階段光開關(guān)熒光蛋白(RSFP)的發(fā)展。相關(guān)成果發(fā)表在2月28日的《美國國家科學(xué)院院刊》(PNAS)雜志上。

與傳統(tǒng)的光不敏感熒光蛋白(比如GFP,RFP)領(lǐng)域相比較,可逆光轉(zhuǎn)化熒光蛋白R(shí)SFP的發(fā)展較為滯后,品種極其單一?,F(xiàn)有的發(fā)綠色熒光的RSFP僅僅有Dronpa家族的幾個(gè)蛋白和剛剛開發(fā)出來的rsEGFP。而Dronpa在進(jìn)行PALM/STROM成像時(shí),單個(gè)分子所發(fā)出的光子數(shù)比較低,成像分辨率差。

在本次研究中,中科院徐濤課題組通過一種光轉(zhuǎn)化熒光蛋白mEos2的隨機(jī)突變,獲得了一系列具有光開關(guān)功能的綠色熒光蛋白,命名為mGeos。這些熒光蛋白都可以被405 nm激光所激活,被488 nm激光關(guān)閉,并且可以反復(fù)開關(guān)多次。新型光開關(guān)熒光蛋白mGeos-M, C, L, S, F and E都具有非常良好的熒光亮度,zui亮的mGeos-C的亮度相當(dāng)于EGFP的1.86倍(熒光蛋白亮度用消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積來表示);mGeos-E同時(shí)具有光控開關(guān)和pH值敏感性,類似于熒光蛋白pHluorin。

借助(F)PALM/STORM平臺(tái),徐濤課題組還深入研究了新型熒光蛋白的單分子性質(zhì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),新型熒光蛋白mGeos-M擁有十分的單分子性質(zhì),是目前已知的單分子釋放出的光子數(shù)zui多的綠色熒光蛋白,其單分子的定位精度可以達(dá)到10 nm左右。(F)PALM/STORM成像發(fā)現(xiàn),與傳統(tǒng)的熒光蛋白Dronpa相比,mGeos-M標(biāo)記的微絲效果更好。

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