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上海士鋒生物科技有限公司給你提供詳細(xì)的免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù)：1073 發(fā)布時(shí)間：2013-7-30
上海士鋒生物科技有限公司給你提供詳細(xì)的免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)
*抗體的染色：
1、 將切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次
2、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）
3、 加入一抗（按照說(shuō)明推薦濃度和孵育條件）
4、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗2分鐘×3次
5、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2），室溫孵育10分鐘
6、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
7、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-AP（試劑3）的二抗，室溫孵育10分鐘
8、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
9、 準(zhǔn)備底物溶液：將1滴試劑4A和4B加入到1ml去離子水中，充分混勻;再加入1滴試劑4C，充分混勻
10、 加100ul（2滴）配好的AP底物溶液，室溫孵育（鏡下檢測(cè)孵育時(shí)間）
11、 使用含有0.05%吐溫20的去離子水沖洗終止反應(yīng)
第二抗體的染色：
12、 加100ul（2滴）雙染增強(qiáng)劑（試劑7），孵育
13、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗2分鐘×3次
14、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）
15、 加入稀釋好的一抗（按照說(shuō)明推薦濃度和孵育條件）
16、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗2分鐘×3次
17、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2），室溫孵育10分鐘
18、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
19、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-HRP（試劑5）的二抗，室溫孵育10分鐘
20、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
21、 準(zhǔn)備底物溶液：將1滴試劑6A和6B加入到1ml去離子水中，充分混勻;再加入1滴試劑6C，充分混勻：
22、 加100ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室溫孵育（鏡下檢測(cè)孵育時(shí)間）
23、 使用含有0.05%吐溫20的去離子水沖洗終止反應(yīng)
24、 使用復(fù)染試劑染色（根據(jù)需要選擇）
25、 封片劑（試劑8）封片，顯微鏡觀察結(jié)果 免疫學(xué)免疫組織化學(xué)