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技術(shù)文章

吖啶橙染色液(1mg/ml)

點(diǎn)擊次數(shù):2290 發(fā)布時(shí)間:2016-4-27

吖啶橙染色液(1mg/ml)

產(chǎn)品簡介:

吖啶橙(Acridine Orange, AO) 屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性,能透過細(xì)胞膜,使核DNARNA染色。因此AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNARNA進(jìn)行檢測。AO不核酸結(jié)合方式主要有:1、插入性結(jié)合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間,這種結(jié)合方式主要為AO DNA的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為530nm,激發(fā)后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合,這種結(jié)合方式主要為AORNA的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為640nm,激發(fā)后呈紅色熒光,少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。

NobleRyder吖啶橙染色液(1mg/ml)為儲(chǔ)存液,使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙染色常與EB染色合用雙染,因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

產(chǎn)品組成

名稱/編號(hào)

D0836

Storage

Acridine Orange Stain(1mg/ml) 

10ml

4 避光

使用說明書

1

 

 

自備材料:

1、熒光顯微鏡

2、低速離心機(jī)

3、PBS

4、細(xì)胞計(jì)數(shù)板

5、載玻片、蓋玻片

 

操作步驟(僅供參考)

1、收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測時(shí),應(yīng)先固定細(xì)胞),用PBS清洗細(xì)胞1次,計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。

2、取適量的細(xì)胞懸液,加入Acridine Orange Stain(1mg/ml),使AO終濃度為8.517μg/ml,輕輕混勻。

3、室溫避光染色1520min,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。

4、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長488nm,阻斷濾光片波長515nm),計(jì)數(shù)并拍照。

 

染色結(jié)果:

正常細(xì)胞

細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光

凋亡細(xì)胞

染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀,被

染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒

注意事項(xiàng):

1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑,較少單獨(dú)使用。

2、吖啶橙染色常與EB染色合用,可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

3、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

4、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

5、試劑有一定毒性,請小心操作。

6、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6個(gè)月有效。

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