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RNA提取過程經(jīng)驗(yàn)分享

2012-12-5  閱讀(2121)

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1.RNA提取的樣品很重要,包括樣品的質(zhì)量,細(xì)胞數(shù),雜質(zhì)含量等等,建議:按照說明書的要求,每毫升TRIzol不超過100mg再低些在50mg左右;樣品的質(zhì)量一定要控制好;研磨得時(shí)間不宜過長,成粉狀即可,液氮常加(研磨的意義主要是使細(xì)胞與TRIzol的作用更充分,如有團(tuán)塊挑出取質(zhì)舍量);作用時(shí)間15分鐘;
 
2.氯仿抽提,一定要混勻,劇烈些沒關(guān)系。但一定要充分作用;
 
3.異丙醇沉淀,混勻,冰上操作會在一定程度上增加RNA產(chǎn)量;
 
4.75%乙醇清洗一次即可,速度我一般選擇高速8000g-10000g之間的,結(jié)果都可;
 
5.檢樣,zui主要的是配置的瓊脂糖膠和電泳緩沖液一定要避免RNA酶的污染,如果有固相RNA酶去除劑,可以用其處理電泳槽5-10后(時(shí)間以說明書為準(zhǔn)),用高壓后的DEPC水沖洗即可,方便,呵呵;
 
以上是我認(rèn)為在RNA提取過程的體會,歡迎大家討論,至于反應(yīng)的時(shí)間按照說明書調(diào)整,其實(shí)說明書已經(jīng)放的比較寬了,這個(gè)我覺得沒有必要討論。

 

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