国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

上海北諾生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 技術(shù)文章 > ELISPOT技術(shù)原理和技術(shù)特點(diǎn)
中級(jí)會(huì)員·14年
聯(lián)系人：
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
電話：
021-57730393
手機(jī)：
15800960770
傳真：
86-021-61496710
地址：
上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座
個(gè)性化：
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址：
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

ELISPOT技術(shù)原理和技術(shù)特點(diǎn)

2013-6-30　　閱讀(1671)

分享：

ELISPOT全名為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。它結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即ELISA技術(shù)），能夠在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況。其技術(shù)原理，一句話概括就是：用抗體捕獲培養(yǎng)中的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式將其表現(xiàn)出來（Sedgwick JD 2005）。

該技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子具有三大優(yōu)點(diǎn)：其一，靈敏度高。在一百萬(wàn)個(gè)陰性細(xì)胞中只要有一個(gè)分泌細(xì)胞因子的陽(yáng)性細(xì)胞即可被檢測(cè)出來。這是目前為止，zui為靈敏的檢測(cè)技術(shù)，靈敏度比傳統(tǒng)的的ELISA方法高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)。其二，單細(xì)胞水平，活細(xì)胞功能檢測(cè)。ELISPOT檢測(cè)的是單個(gè)細(xì)胞分泌，而非細(xì)胞群體的平均分泌。在檢測(cè)的過程中，有活細(xì)胞培養(yǎng)與抗原刺激階段，檢測(cè)的是活細(xì)胞的功能，而非死細(xì)胞的物。其三，操作簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，可以進(jìn)行高筒量篩選。ELISPOT沒有復(fù)雜的細(xì)胞體外擴(kuò)增過程，不使用同位素，不需要大型的、專門的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備。按照標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作，一個(gè)實(shí)驗(yàn)者可以同時(shí)處理數(shù)百個(gè)樣品，效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它檢測(cè)方法（Kalyuzhny AE 2005）。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在96孔培養(yǎng)板上進(jìn)行，直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì)，包被上特異性的單克隆抗體，用以捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。（由于涉及到細(xì)胞培養(yǎng)的過程，對(duì)單克隆抗體的要求要遠(yuǎn)高于ELISA中的捕獲抗體，該抗體需要無毒，不含內(nèi)毒素，親和力高等特點(diǎn)。）之后，在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細(xì)胞培養(yǎng)基（現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟，培養(yǎng)基中可以不再含有血清）、待檢測(cè)的細(xì)胞以及抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)。

在特異性的抗原或者非特異性的有絲分裂原的刺激下，數(shù)小時(shí)之內(nèi)，T細(xì)胞就會(huì)開始分泌各種細(xì)胞因子。細(xì)胞因子當(dāng)即就被位于細(xì)胞下方的膜上的單克隆抗體所捕獲。在洗去細(xì)胞之后，被捕獲的細(xì)胞因子可以與生物素標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，然后用酶標(biāo)親和素再與生物素結(jié)合，進(jìn)行化學(xué)酶聯(lián)顯色，就可以在膜的局部形成一個(gè)個(gè)圓形的斑點(diǎn)。每一個(gè)斑點(diǎn)就對(duì)應(yīng)了當(dāng)初一個(gè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞，這些細(xì)胞被稱為斑點(diǎn)形成細(xì)胞（Spots forming cells SFCs）。統(tǒng)計(jì)膜上的斑點(diǎn)的數(shù)目，再除以當(dāng)初加入孔內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)，就可以計(jì)算出陽(yáng)性細(xì)胞的頻率。

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏！
標(biāo)簽：
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用：

提示

X
您的留言已提交成功！我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
產(chǎn)品對(duì)比 二維碼

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

對(duì)比框

在線留言
怀安县| 当雄县| 汾西县| 安龙县| 延川县| 上思县| 达拉特旗| 阜平县| 宝鸡市| 章丘市| 拜泉县| 象州县| 湘西| 休宁县| 延津县| 礼泉县| 精河县| 兴隆县| 辉南县| 六安市| 新野县| 和平县| 洛阳市| 随州市| 弋阳县| 广州市| 泗水县| 海伦市| 赤城县| 邛崃市| 长葛市| 土默特左旗| 温州市| 定襄县| 思南县| 静乐县| 沁阳市| 澄城县| 塘沽区| 阳信县| 双桥区|