国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

歡迎來到化工儀器網(wǎng)請(qǐng)登錄|免費(fèi)注冊(cè)|產(chǎn)品展廳|收藏該商鋪

上海北諾生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置：首頁> 技術(shù)文章 > 專題：轉(zhuǎn)染（transfection）--轉(zhuǎn)染試劑的選擇

產(chǎn)品分類品牌

MicroBioLogics質(zhì)控菌種

SGM指示劑

Moltox 遺傳毒性（Ames）試驗(yàn)試劑

標(biāo)準(zhǔn)品

ATCC菌株

細(xì)胞株

細(xì)胞培養(yǎng)

免疫學(xué)

分子生物學(xué)

常規(guī)生化試劑

omega試劑盒

耗材和移液器

Roche

Qiagen

Promega

Merck-Millipore

Pierce

Amresco

R&D

CST

Sigma

invitrogen

上海北諾生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員·14年

聯(lián)系人：: 周經(jīng)理劉經(jīng)理

電話：: 021-57730393

手機(jī)：: 15800960770

傳真：: 86-021-61496710

地址：: 上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座

個(gè)性化：: www.bnbiotech.com

網(wǎng)址：: www.bnbiotech.com

在線咨詢給我留言

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

專題：轉(zhuǎn)染（transfection）--轉(zhuǎn)染試劑的選擇

2013-7-8　　閱讀(2115)

分享：

下面我們?yōu)榇蠹姨峁┮恍┏Ｓ弥|(zhì)體試劑的適用細(xì)胞系信息以及轉(zhuǎn)染FAQs：

1. promega公司

Promega轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品適合于人HeLa，Hep G2，293，K562，Jurkat；猴COS-7，CV-1；小鼠NIH3T3；倉(cāng)鼠BHK，CHO；大鼠PC12；昆蟲S19等等細(xì)胞系的RNAi轉(zhuǎn)染。詳情請(qǐng)參閱http：//www.promega.com.cn/files/cpxl/zhuanran/zhuanran.htm

2. Invitrogen公司

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，我公司推薦您使用Invitrogen公司生產(chǎn)的lipofetamine2000試劑盒。適合于Hela，BHK，HEK，COS-7，PC12，NIH3T3等各種常用細(xì)胞系的RNAi轉(zhuǎn)染。詳情請(qǐng)參閱http：//invitrogen.com/content.cfm?pageid=4547%20

3. 轉(zhuǎn)染FAQs：

針對(duì)同種陽離子脂質(zhì)體的疑難解答

Q1：轉(zhuǎn)染效率低

（1）沒有使用優(yōu)化的陽離子脂質(zhì)體試劑。解決建議：選擇針對(duì)您的細(xì)胞類型轉(zhuǎn)染效率可能zui高的陽離子脂質(zhì)體試劑。參見附錄A或（www.invitrogen.com）上“Transfection Collection”中的參考文獻(xiàn)列表。

（2）沒有使用優(yōu)化條件。解決建議：優(yōu)化陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA的量。參見第7章優(yōu)化步驟。參見（www.invitrogen.com在Tech-online分子生物學(xué)部分）上的細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)染步驟。

（3）DNA-陽離子脂質(zhì)體試劑復(fù)合物在存在血清條件下形成。解決建議：在復(fù)合體形成時(shí)不要使用血清。OPTI-MEM I培養(yǎng)基和DMEM是用于復(fù)合體形成的較好的培養(yǎng)基。如果使用含有血清的培養(yǎng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)染，保證在無血清條件形成復(fù)合物。注意：不要將OPTI-MEM I培養(yǎng)基用于LIPOFECTAMINE PLUS試劑或昆蟲細(xì)胞。對(duì)于Sf9和Sf21細(xì)胞，Sf-900Ⅱ SFM會(huì)得到*結(jié)果。

（4）存在抑制劑。解決建議：不要在用于制備DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素，透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。

（5）不恰當(dāng)?shù)募?xì)胞密度。解決建議：細(xì)胞密度應(yīng)該在轉(zhuǎn)染時(shí)融合度為70%~90%。

（6）轉(zhuǎn)染DNA的啟動(dòng)子-增強(qiáng)子沒有被宿主細(xì)胞識(shí)別。解決建議：確保轉(zhuǎn)染DNA的啟動(dòng)子-增強(qiáng)子同目的細(xì)胞類型兼容。

（7）陽離子脂質(zhì)體試劑凍結(jié)。解決建議：不要使用凍結(jié)的或儲(chǔ)存溫度低于4℃的陽離子脂質(zhì)體試劑。

（8）轉(zhuǎn)染分析的問題。解決建議：轉(zhuǎn)染分析中加入陽性對(duì)照。

（9）質(zhì)粒純化的問題。解決建議：請(qǐng)核對(duì)是否使用轉(zhuǎn)染級(jí)的質(zhì)粒純化試劑盒。通常轉(zhuǎn)染級(jí)的質(zhì)粒純化試劑盒使用DEAE樹脂而非硅樹脂，并且是用重力流動(dòng)（過濾）的方法而不是離心技術(shù)，因?yàn)闃渲瑤淼奈廴緯?huì)導(dǎo)致較高的內(nèi)毒素。另一種方法（可用于任何級(jí)別的純化試劑盒），是在zui后一步從樹脂柱上洗脫質(zhì)粒后，將溶液置于55℃的水浴上保溫5分鐘。zui后小心地從上至下吸取2/3的溶液（不要碰到底部）使用。這是減少樹脂的交叉污染的方法。

Q2：細(xì)胞死亡率高。

（1）DNA量太高。解決建議：作一個(gè)劑量-反應(yīng)曲線以確定*的DNA量。在劑量-反應(yīng)轉(zhuǎn)染中加入陽離子脂質(zhì)體試劑，因?yàn)閱为?dú)DNA也會(huì)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有一個(gè)基礎(chǔ)的影響。參見第7章微調(diào)/優(yōu)化方法。

（2）陽離子脂質(zhì)體試劑量太高。解決建議：作一個(gè)劑量-反應(yīng)曲線以確定*的陽離子脂質(zhì)體試劑的量。在劑量-反應(yīng)轉(zhuǎn)染中加入DNA，因?yàn)閱为?dú)陽離子脂質(zhì)體試劑也只對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有一個(gè)基礎(chǔ)的影響。參見第7章微調(diào)/優(yōu)化方法。

（3）在轉(zhuǎn)染過程中使用抗菌素。解決建議：在轉(zhuǎn)染過程中不要使用氯霉素，青霉素或鏈霉素，因?yàn)殛栯x子脂質(zhì)體試劑使細(xì)胞更敏感。

（4）細(xì)胞太少。解決建議：作一個(gè)劑量-反應(yīng)曲線以確定每個(gè)轉(zhuǎn)染過程中*的細(xì)胞數(shù)量。根據(jù)您的應(yīng)用所要求的效率調(diào)整細(xì)胞數(shù)量。

（5）在無血清條件下細(xì)胞活性降低。解決建議：使用OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基。降低或省去在無血清培養(yǎng)基中清洗的次數(shù)。在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用5%到10%的血清。確保在不存在血清的條件下形成復(fù)合物。

（6）陽離子脂質(zhì)體試劑氧化了。解決建議：不要過分?jǐn)噭?dòng)或振蕩陽離子脂質(zhì)體試劑；這可能會(huì)形成陽離子脂質(zhì)體試劑的過氧化物。

（7）對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，篩選抗生素加入的太快。解決建議：在加入篩選性抗生素前至少預(yù)留48小時(shí)使細(xì)胞表達(dá)抗性基因。

Q3：陽離子脂質(zhì)體試劑-DNA復(fù)合物沉淀。注意：在顯微靜下可以在細(xì)胞上觀察到小的顆粒狀顆粒沉淀。這是正常的。此沉淀是否存在并不表明轉(zhuǎn)染效率的高低。

A3：
（1）存在過剩的EDTA。解決建議：使用DNA水溶液，如果是在TE中，使用濃度<0.3mM的EDTA溶液稀釋DNA。
（2）DNA或陽離子脂質(zhì)體試劑濃度過高。解決建議：確保陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA的濃度不要超過復(fù)合物形成的建議量（參見表5）。

Q4：轉(zhuǎn)染重復(fù)性不好。

A4：
（1）轉(zhuǎn)染時(shí)的融合度波動(dòng)。解決建議：在不同的轉(zhuǎn)染時(shí)報(bào)持所有的轉(zhuǎn)染參數(shù)恒定，如融合度，傳代次數(shù)和生長(zhǎng)時(shí)相等。

（2）在培養(yǎng)中細(xì)胞發(fā)生變化。解決建議：如果可能，使用來源于經(jīng)選擇轉(zhuǎn)染效率較高亞系的細(xì)胞。如果可能，融化新鮮細(xì)胞。

上一篇：專題：細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法

下一篇：專題：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染分析研究的步驟

上海北諾生物科技有限公司 - 主營(yíng)產(chǎn)品：免疫學(xué),細(xì)胞學(xué),分子生物學(xué),微生物學(xué),即用型試劑,常規(guī)生化試 ...

化工儀器網(wǎng)設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 Copyright(C) http://www.duoo135.com All rights reserved

以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

點(diǎn)擊刷新驗(yàn)證碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X

信息收藏成功！

該信息已收藏！

查看我的收藏夾設(shè)置標(biāo)簽

標(biāo)簽：: 保存成功
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用：

提示

X

您的留言已提交成功！我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

產(chǎn)品對(duì)比 二維碼 返回頂部

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

對(duì)比框

唐山市| 沁源县| 定兴县| 将乐县| 林芝县| 吉安县| 电白县| 板桥市| 二手房| 哈尔滨市| 永丰县| 西贡区| 河南省| 鹤岗市| 荆门市| 临城县| 佛冈县| 巍山| 新巴尔虎右旗| 兴安盟| 东莞市| 昌宁县| 乌鲁木齐县| 星座| 湘西| 通道| 建水县| 荣成市| 牙克石市| 丹阳市| 通州区| 新源县| 鄄城县| 平湖市| 台湾省| 肃宁县| 灵川县| 平塘县| 三河市| 南雄市| 杂多县|