国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

上海北諾生物科技有限公司

中級會員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 感受態(tài)制備:農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備和轉(zhuǎn)化
中級會員·14年
聯(lián)人:
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
話:
021-57730393
機(jī):
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
化:
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

感受態(tài)制備:農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備和轉(zhuǎn)化

2013-10-30  閱讀(1330)

分享:

雙元載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

1.1農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備

1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線,28℃培養(yǎng)。

1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養(yǎng)基中,220rpm 28℃振蕩培養(yǎng)12-16 hr。

1.1.3. 取2ml菌液轉(zhuǎn)接于100ml YM液體培養(yǎng)基中,28℃220rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.5。

1.1.4. 轉(zhuǎn)入無菌離心管,5000rpm離心5min,去上清液。

1.1.5. 加入10ml預(yù)冷的0.1M的CaCl2溶液,輕輕懸浮細(xì)胞,冰上放置20min。4℃5000rpm離心5min,去上清。

1.1.6. 加入4ml預(yù)冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液,輕輕懸浮。

1.1.7. 農(nóng)桿菌懸浮液分裝于無菌Eppendorf管中,每管200μl凍存于-70℃。

1.2. 雙元載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105

取1μg左右的質(zhì)粒DNA加入到200ml EHA105感受態(tài)細(xì)胞中,混勻后,冰浴30min,-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min,接著冰浴2min,加入800mlYM液體培養(yǎng)基28℃,175rpm搖培3hr后涂在含50μg/ml Kanamycin的YM平板上。28℃培養(yǎng)到形成單菌落。

其中 YM 可以用LB 代替 ,*次的 CaCl2 溶液可用溶液(0.1MCaCl2 0.01Tris-HCl(7.0) 0.01 DTT)替代。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
產(chǎn)品對比 二維碼

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

對比框

在線留言
竹山县| 阿拉善盟| 镇江市| 灵石县| 土默特左旗| 舟曲县| 阳高县| 镇远县| 许昌县| 华亭县| 保康县| 通辽市| 垫江县| 板桥市| 三门峡市| 雅安市| 建昌县| 鹤山市| 阿坝| 文水县| 肥乡县| 剑河县| 民丰县| 万山特区| 玛多县| 郁南县| 云安县| 临清市| 灌南县| 额敏县| 淳化县| 绵阳市| 乐清市| 桃园县| 莒南县| 青海省| 鄢陵县| 太仆寺旗| 治县。| 江城| 桃源县|