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免疫學技術(shù)專題:中性粒細胞吞噬功能的測定

2014-6-18  閱讀(1539)

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中性粒細胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等,是機體天然免疫力的重要組成部分。

試劑及材料

1. 白色葡萄球菌

2. 肉湯培養(yǎng)基

3. 鹼性美藍液

操作方法

1. 菌液的制備  將白色葡萄球菌接種于中,放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右;置水浴中加熱100℃ 10min殺死細菌,用無菌生理鹽水稀釋成6×108 細菌/ml備用;

2. 用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl,立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi),輕輕攪動混勻, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(nèi)(此容器先放37℃溫箱中預溫),在37℃溫箱中作用30min,其間每隔10min搖勻一次;

3. 作用完畢,取1小滴混合液置于潔凈無油污的載玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,鹼性美藍液染2~3min,置油鏡下觀察。隨機計數(shù)100個中性粒細胞,分別記錄發(fā)生吞噬和未吞噬的白細胞數(shù),對有吞噬作用的白細胞,應(yīng)同時記錄所吞噬的細菌數(shù);

結(jié)果分析

吞噬細胞%=即100個中性粒細胞中吞噬有細菌的細胞數(shù);

吞噬指數(shù)=將100個中性粒細胞所吞噬的細菌總數(shù)除以100,得到每個白細胞吞噬細菌的平均數(shù),即為吞噬指數(shù)。

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