現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方法 |
板條不顯色或者無(wú)相應(yīng)數(shù)值 | 試劑使用順序混亂，或操作步驟出錯(cuò) | 嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)說(shuō)明重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
使用了不同批次的試劑 | 確保試劑來(lái)自同一試劑盒 | |
板條受潮嚴(yán)重 | 板條要封好，干燥劑失效要及時(shí)更換 | |
低 吸 光 度 OD 值 | 試劑過(guò)期，或者不同的批次混用 | 查證過(guò)期試劑和批次 |
洗液配制錯(cuò)誤、洗滌浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 按照說(shuō)明書要求洗滌，并正確配制洗液 | |
孵育時(shí)間過(guò)短 | 按照說(shuō)明書要求，嚴(yán)格計(jì)算好時(shí)間 | |
試劑污染 | 確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿 | |
試劑溫度過(guò)低 | 根據(jù)試劑體積大小回溫時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，確保試劑*回溫 | |
使用錯(cuò)誤波長(zhǎng)讀數(shù)，或者酶 標(biāo)儀失靈 | 確保450 nm波長(zhǎng)讀數(shù)，檢查酶標(biāo)儀是否故障 | |
試劑盒處于的條件 | 使用完畢的部分請(qǐng)立即放回冰箱，勿置于過(guò)熱環(huán)境時(shí)間太長(zhǎng) | |
過(guò)高的 背景值或吸光度（OD值） | 使用了質(zhì)量差的水配制試劑 | 使用雙蒸水或去離子水配制試劑 |
洗滌不當(dāng)或者洗板機(jī)洗板效果不好 | 增加1-2次洗滌，每孔至少加入250μL洗液 | |
酶標(biāo)儀失靈，如OD值讀數(shù)很高而顏色很淺 | 使用校正微孔板檢查酶標(biāo)儀，檢查光源 | |
實(shí)驗(yàn)室溫度過(guò)高，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 測(cè)定操作溫度是否合適，時(shí)間是否計(jì)算正確 | |
試劑混淆，被污染或者配制不當(dāng) | 確保使用正確的試劑，準(zhǔn)確配制，避免污染 | |
板內(nèi) 差異性 大 | 加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品等的時(shí)間不一致 | 使用多道槍加樣，同種試劑加樣途中不能中斷 |
多道槍使用不當(dāng) | 校準(zhǔn)多道槍，檢查吸嘴是否套緊，確保吸液量一致 | |
洗滌系統(tǒng)出現(xiàn)故障 | 檢查洗滌系統(tǒng)，保持良好運(yùn)行 | |
板 間 差 異 性 大 | 板與板之間孵育時(shí)間相差太大 | 獨(dú)立計(jì)時(shí)，確保一致的孵育時(shí)間 |
板與板之間不一致的洗滌過(guò)程 | 確保相同的洗滌次數(shù)，保證洗滌系統(tǒng)正常運(yùn)作 | |
使用移液槍不當(dāng) | 檢查移液槍，確保吸取相同液量 | |
試劑和樣品處于不同溫度 | 確保盒內(nèi)試劑和樣品液等充分回溫，如果試劑體積較大則需要回溫較長(zhǎng)時(shí)間。不能用溫水浴回溫樣品 | |
不同批次的試劑混用，或試劑盒過(guò)期 | 試劑不要混用，通常0標(biāo)準(zhǔn)品的OD值小于0.5顯示試劑質(zhì)量下降 | |
一個(gè)或 多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)點(diǎn)超出曲線范圍 | 標(biāo)準(zhǔn)品添加順序混亂，或者放置于錯(cuò)誤位置 | 按照說(shuō)明要求重復(fù)實(shí)驗(yàn)，保證標(biāo)準(zhǔn)品添加正確 |
標(biāo)準(zhǔn)品被污染或與其他標(biāo)準(zhǔn)品混淆 | 改用新的標(biāo)準(zhǔn)品，按照由低濃度到高濃度的順序添加標(biāo)準(zhǔn)品 | |
洗滌不一致或者洗滌系統(tǒng)失靈 | 遵循一如既往的洗滌方式，檢查洗滌系統(tǒng) | |
加入標(biāo)準(zhǔn)品和試劑的時(shí)間不一致 | 由低到高濃度依次添加標(biāo)準(zhǔn)品，使用多道槍移液 | |
多道槍使用不當(dāng) | 校準(zhǔn)多道槍，檢查吸嘴是否套緊，確保吸液量一致 |
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