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技術(shù)文章

小鼠活性氧(ROS)ELISA試劑盒使用說明書

閱讀:1223          發(fā)布時間:2023-6-14

小鼠活性氧(ROSELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                            96T

20 IU/ml -500 IU/ml

 

使用目的:

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中活性氧(ROS含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠活性氧(ROS)水平。用純化的小鼠活性氧(ROS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧(ROS,再與HRP標(biāo)記的活性氧(ROS抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過CHE底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧(ROS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準曲線計算樣品中小鼠活性氧(ROS)濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準品(960IU/ml

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8

9

標(biāo)準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

480 IU/ml

5號標(biāo)準品

150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

240 IU/ml

4號標(biāo)準品

150μl5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

120 IU/ml

3號標(biāo)準品

150μl4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

60 IU/ml

2號標(biāo)準品

150μl3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

30 IU/ml

1號標(biāo)準品

150μl2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

 

 

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

 


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