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技術(shù)文章

ELISA在食品微生物檢測中的應(yīng)用方法

閱讀:778          發(fā)布時(shí)間:2024-11-8

1. 直接ELISA法

直接ELISA法適用于檢測食品中的微生物抗原。具體步驟如下:

· 將微生物抗原包被在微孔板上。

· 加入待測樣本,樣本中的抗體與包被的抗原結(jié)合。

· 加入酶標(biāo)記的二抗,與樣本中的抗體結(jié)合。

· 洗滌后加入底物,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,從而定量測定樣本中的抗體含量。


2. 間接ELISA法

間接ELISA法適用于檢測食品中的微生物抗體。具體步驟如下:

· 將已知微生物抗原包被在微孔板上。

· 加入待測樣本,樣本中的抗體與包被的抗原結(jié)合。

· 加入酶標(biāo)記的抗抗體(即二抗),與樣本中的抗體結(jié)合。

· 洗滌后加入底物,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,從而定量測定樣本中的抗體含量。


3. 雙抗體夾心法

雙抗體夾心法適用于檢測食品中的大分子微生物抗原。具體步驟如下:

· 將已知的第一抗體包被在微孔板上。

· 加入待測樣本,樣本中的抗原與第一抗體結(jié)合。

· 加入酶標(biāo)記的第二抗體,與抗原的另一表位結(jié)合,形成雙抗體夾心復(fù)合物。

· 洗滌后加入底物,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,從而定量測定樣本中的抗原含量。


4. 競爭ELISA法

競爭ELISA法適用于檢測食品中未知濃度的微生物抗原。具體步驟如下:

· 將已知濃度的微生物抗原包被在微孔板上。

· 同時(shí)加入待測樣本和酶標(biāo)記的抗原,二者競爭與固相抗原結(jié)合。

· 洗滌后加入底物,顯色反應(yīng)后測定吸光度值。由于待測樣本中抗原濃度的不同,與固相抗原結(jié)合的酶標(biāo)記抗原量也會(huì)不同,從而影響顯色反應(yīng)的深淺。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量測定樣本中的抗原含量。


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