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技術(shù)文章

細(xì)胞株保存技術(shù)全流程

閱讀:69          發(fā)布時間:2025-6-6

一、保存方法選擇與技術(shù)參數(shù)優(yōu)化

1. 短期保存(-80℃)

凍存液配方?

通用型:10% DMSO + 90% FBS,需預(yù)冷至4℃并與細(xì)胞懸液等體積混合

低毒性型:5% DMSO + 2% FBS + 3%海藻糖(適用于敏感細(xì)胞)

 

程序降溫?

采用梯度冷凍:

4℃ → -20℃(-1℃/min)→ -80℃(過夜)→液氮

使用程序降溫盒可替代梯度操作

 

2. 長期保存(液氮)

氣相保存?

溫度范圍:-150℃~-190℃,需配備氧濃度監(jiān)測(<500ppm)

液相保存?

采用雙層凍存管(耐壓>500psi),推薦CryoBox™定位系統(tǒng)

 

二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

image.png

2. 凍存分裝規(guī)范

分裝體積:≤1.5mL/管(耐高壓螺紋管)

標(biāo)記信息:細(xì)胞株編號+傳代次數(shù)+凍存日期+操作者


3. 復(fù)蘇關(guān)鍵步驟

快速解凍?:37℃水浴震蕩90秒(冰晶完-全消失時終止)

梯度洗滌?:

首步加入等量預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基稀釋

800g離心5分鐘去除DMSO殘留

 

三、質(zhì)量控制體系

1. 過程監(jiān)控

溫度穩(wěn)定性?:

-80℃冰箱每日溫差≤±2℃,液氮罐周蒸發(fā)量<0.5L

樣本追溯?:

建立電子檔案(含凍存液批號/操作人員/設(shè)備編號)

2. 風(fēng)險控制

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四、特殊細(xì)胞處理策略

1. 懸浮細(xì)胞

預(yù)處理:添加5%羥乙-基淀粉防止細(xì)胞聚集

凍存密度:調(diào)整為1×10?/mL(常規(guī)細(xì)胞的2倍)

2. 原代細(xì)胞

凍存液優(yōu)化:無血清配方(含15%海藻糖+5%人血白蛋白)

分裝方式:預(yù)冷凍存管+快速分裝(操作時間<3分鐘)

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