技術(shù)文章
細胞株保存技術(shù)全流程
閱讀:51 發(fā)布時間:2025-6-6一、保存方法選擇與技術(shù)參數(shù)優(yōu)化
1. 短期保存(-80℃)
凍存液配方?
通用型:10% DMSO + 90% FBS,需預(yù)冷至4℃并與細胞懸液等體積混合
低毒性型:5% DMSO + 2% FBS + 3%海藻糖(適用于敏感細胞)
程序降溫?
采用梯度冷凍:
4℃ → -20℃(-1℃/min)→ -80℃(過夜)→液氮
使用程序降溫盒可替代梯度操作
2. 長期保存(液氮)
氣相保存?
溫度范圍:-150℃~-190℃,需配備氧濃度監(jiān)測(<500ppm)
液相保存?
采用雙層凍存管(耐壓>500psi),推薦CryoBox™定位系統(tǒng)
二、標準化操作流程
2. 凍存分裝規(guī)范
分裝體積:≤1.5mL/管(耐高壓螺紋管)
標記信息:細胞株編號+傳代次數(shù)+凍存日期+操作者
3. 復蘇關(guān)鍵步驟
快速解凍?:37℃水浴震蕩90秒(冰晶完-全消失時終止)
梯度洗滌?:
首步加入等量預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基稀釋
800g離心5分鐘去除DMSO殘留
三、質(zhì)量控制體系
1. 過程監(jiān)控
溫度穩(wěn)定性?:
-80℃冰箱每日溫差≤±2℃,液氮罐周蒸發(fā)量<0.5L
樣本追溯?:
建立電子檔案(含凍存液批號/操作人員/設(shè)備編號)
2. 風險控制
四、特殊細胞處理策略
1. 懸浮細胞
預(yù)處理:添加5%羥乙-基淀粉防止細胞聚集
凍存密度:調(diào)整為1×10?/mL(常規(guī)細胞的2倍)
2. 原代細胞
凍存液優(yōu)化:無血清配方(含15%海藻糖+5%人血白蛋白)
分裝方式:預(yù)冷凍存管+快速分裝(操作時間<3分鐘)