技術(shù)文章
細(xì)胞株保存技術(shù)全流程
閱讀:65 發(fā)布時(shí)間:2025-6-6一、保存方法選擇與技術(shù)參數(shù)優(yōu)化
1. 短期保存(-80℃)
凍存液配方?
通用型:10% DMSO + 90% FBS,需預(yù)冷至4℃并與細(xì)胞懸液等體積混合
低毒性型:5% DMSO + 2% FBS + 3%海藻糖(適用于敏感細(xì)胞)
程序降溫?
采用梯度冷凍:
4℃ → -20℃(-1℃/min)→ -80℃(過(guò)夜)→液氮
使用程序降溫盒可替代梯度操作
2. 長(zhǎng)期保存(液氮)
氣相保存?
溫度范圍:-150℃~-190℃,需配備氧濃度監(jiān)測(cè)(<500ppm)
液相保存?
采用雙層凍存管(耐壓>500psi),推薦CryoBox™定位系統(tǒng)
二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程
2. 凍存分裝規(guī)范
分裝體積:≤1.5mL/管(耐高壓螺紋管)
標(biāo)記信息:細(xì)胞株編號(hào)+傳代次數(shù)+凍存日期+操作者
3. 復(fù)蘇關(guān)鍵步驟
快速解凍?:37℃水浴震蕩90秒(冰晶完-全消失時(shí)終止)
梯度洗滌?:
首步加入等量預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋
800g離心5分鐘去除DMSO殘留
三、質(zhì)量控制體系
1. 過(guò)程監(jiān)控
溫度穩(wěn)定性?:
-80℃冰箱每日溫差≤±2℃,液氮罐周蒸發(fā)量<0.5L
樣本追溯?:
建立電子檔案(含凍存液批號(hào)/操作人員/設(shè)備編號(hào))
2. 風(fēng)險(xiǎn)控制
四、特殊細(xì)胞處理策略
1. 懸浮細(xì)胞
預(yù)處理:添加5%羥乙-基淀粉防止細(xì)胞聚集
凍存密度:調(diào)整為1×10?/mL(常規(guī)細(xì)胞的2倍)
2. 原代細(xì)胞
凍存液優(yōu)化:無(wú)血清配方(含15%海藻糖+5%人血白蛋白)
分裝方式:預(yù)冷凍存管+快速分裝(操作時(shí)間<3分鐘)