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今日主題：ELISA成功的原因重在點子上
閱讀：1271 發(fā)布時間：2015-3-30[導讀] ELISA實驗成功的原因有哪些？您的實驗思路是怎樣的？ELISA試劑盒作為上海滬鼎生物公司主營且熱銷的產品之一，ELISA實驗技術問題必然是售后服務中的一大焦點。日前上午9時，我公司展開2015酶聯(lián)免疫技術交流會，會議主題也正是我公司今日資訊主題：ELISA實驗成功的原因重在“點子"上。
會中，我公司技術總監(jiān)表示：從標本的采集到實驗操作步驟完畢，每一個流程都是影響實驗的因素。當然，這是在試劑盒質量保證且正確保存的條件下。為什么說ELISA實驗成功的原因重在“點子"上？只要每一步流程都能夠達到正確的“點"上，那么您定能夠做出的實驗。
一、檢測標本的收集
①收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管?！ ?/span>
②血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標本?！ ?/span>
③標本應清澈透明，懸浮物應離心去除?！ ?/span>
④標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-70℃電冰箱內，避免反復凍融，3-6月內檢測。
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。標本應避免反復凍融?/span>
二、不斷學習ELISA操作技巧
1.操作前應對實驗的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
2.正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導致結果錯誤，實驗重復性差。
3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應孑L內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性。
4.要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯誤。
5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。
三、操作示意圖
操作指南：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果
四、OD值的范圍
在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的，不容小覷。說到OD值范圍，我公司業(yè)務員在售后問題的處理過程中也常會有客戶咨詢其范圍是多少。其實是不一定的，我們以AβELISA為例，2以上就會偏飽和，變化不容易做出來，所以一般把model組控制在0.8-1.5，而control組的話基本跟空白差不多，不到0.1。
所以，一般情況下我們會建議先做個標曲以及樣品的梯度稀釋，然后選擇在標曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
同時，也與使用的detector有關，detector有自己的檢測范圍和線性范圍。如果實驗室使用的儀器，說明書上說檢測范圍是0~4，線性范圍是0~3，但我們自己的實驗結果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測空白的沒有經過處理的Elisa孔，大致在0左右。
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上海滬鼎生物科技有限公司
2015年03月30日