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500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液產品說明書（中文版）

 

主要用途

 

500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液是一種旨在模擬超氧化物歧化酶的功能，清除超氧自由基陰離子的輔助試劑。其適用于氧化應急活性氧等研究。其適用于各種細胞培養(yǎng)、動物實驗中超氧自由基陰離子的清除。產品即到即用，嚴格無菌，性能穩(wěn)定，高純活性。

 

技術背景

 

4-羥基-2,2,6,6,-四甲基哌啶氧（4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxy；TEMPO）是一種自旋標記（spin label）的水溶性穩(wěn)定哌啶氮氧化合物（piperidine nitroxide），分子式是C9H18NO2，分子量為172.24。其主要作用在于自由通過質膜，具有超氧化物歧化酶的功能，清除超氧自由基陰離子，起到活性氧的解毒作用，同時具有神經保護、抗炎和鎮(zhèn)痛作用。 

 

產品內容

 

清除劑（Reagent A）   毫升

產品說明書        1份

 

保存方式

 

保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

*細胞培養(yǎng)液：用于支持細胞生長的營養(yǎng)液

細胞培養(yǎng)板（瓶）：用于細胞培養(yǎng)的容器

蓋玻片：用于細胞生長的載體

臺式離心機：用于懸浮細胞的收集

細胞培養(yǎng)箱：用于細胞孵育

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

 

實驗提示

 

實驗開始前，將－20℃冰箱里的清除劑（Reagent A）置于冰槽里融化。然后進行下列操作：

 

方法一：貼壁細胞處理

 

• 在6孔細胞培養(yǎng)板里的1孔放置蓋玻片
• 加入2毫升用戶自備的*細胞培養(yǎng)液
• 加入1毫升待測細胞（1至5 X 10⁵細胞）
• 輕輕搖動，使細胞均勻分布
• 放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育，直至細胞生長到50％鋪滿率
• 小心抽掉細胞培養(yǎng)液
• 加入3毫升新鮮的用戶自備的*細胞培養(yǎng)液
• 加入xx微升清除劑（Reagent A）
• 輕輕搖動培養(yǎng)板，混勻
• 放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育24小時
• 小心抽掉含有清除劑（Reagent A）的細胞培養(yǎng)液
• 繼續(xù)后續(xù)操作

 

方法二：懸浮細胞處理

 

• 準備1個25cm²細胞培養(yǎng)瓶
• 加入2毫升用戶自備的*細胞培養(yǎng)液
• 加入1毫升待測細胞（5 X 10⁵細胞）
• 輕輕搖動，使細胞均勻分布
• 放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育24小時
• 小心移出細胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽掉上清液
• 加入3毫升新鮮的*細胞培養(yǎng)液，混勻細胞顆粒群
• 加入xx微升清除劑（Reagent A）
• 輕輕搖動離心管，混勻
• 放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育24小時
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽掉含有清除劑（Reagent A）的細胞培養(yǎng)液
• 繼續(xù)后續(xù)操作

 

方法三：動物實驗

 

• 準備1個待測的實驗動物
• 靜脈注射xx微升清除劑（Reagent A）/100克動物體重 
• 或腹腔注射xx微升清除劑（Reagent A）/100克動物體重 
• 或輸液/灌注xx至xx微升清除劑（Reagent A）/100克動物體重
• 注射后30分鐘至4小時繼續(xù)后續(xù)麻醉、斷頸椎、解剖、組織制片等操作

 

注意事項

 

• 本產品為1毫升規(guī)格（100倍濃度）
• 本產品即到即用，無需進行任何處理
• 使用時，戴好手套
• 避免反復凍融
• 使用時，避免污染母液
• 細胞孵育時間可以根據(jù)用戶的具體情況調整，通常為6小時至24小時
• 動物實驗可以每天注射，持續(xù)1周，然后觀察分析