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細胞污染全攻略(含防、治妙招)

2019-8-26  閱讀(1032)

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細胞污染全攻略(含防、治妙招)




我擦……

細胞又污染了!

咋整,快崩潰了!!

Who can help me! ??!                         君莫急,小翊來幫您!

專治各種細胞疑難雜癥,

小翊送你完整攻略。

攻略一:了解細胞污染

古人云:知己知彼方可百戰(zhàn)百勝,因此了解細胞污染是非常重要的。常見的污染類型細菌污染、真菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、病毒污染以及非同種細胞污染。

1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡高倍鏡大多可見,根據(jù)感染細菌種類不同,呈現(xiàn)不同的外形。其培養(yǎng)基一般會渾濁、變黃較快,對細胞生狀態(tài)影響明顯。


圖1:
細胞受到細菌污染圖

2、真菌真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,珊瑚狀,隨時間轉(zhuǎn)移會長出黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,一般培養(yǎng)基清亮,不變色,不細菌易被發(fā)現(xiàn),一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在,細胞污染就比較嚴重了,也很難救活。


圖2:
細胞受到真菌污染圖

3、支原體:細菌和真菌造成的污染相對容易發(fā)現(xiàn),然而支原體造成的污染很難察覺,即使生長密度高達 107-109CFU/ml,也很難有污染跡象(渾濁、pH變化等)。支原體污染后導(dǎo)致細胞生長變慢,狀態(tài)變差,不會馬上使細胞致死,但會影響細胞內(nèi)的各種參數(shù),如改變細胞新陳代謝,改變DNA轉(zhuǎn)染效率。支原體感染細胞以后,細胞病變不明顯,只是慢慢si去。

圖3細胞受到支原體污染圖

4、黑膠蟲*一般低倍鏡下觀察呈黑色點狀,高倍下可看見黑色物蠕動,培養(yǎng)液不易變渾濁,在細胞增殖旺盛之后會減少或消失。有時也會出現(xiàn)觀測到的運動物明顯增多,細胞狀態(tài)變差,終死亡。*對于黑膠蟲沒有明確的定論,通常認為黑色物是由于多種原因?qū)е录毎麪顟B(tài)變差、死亡細胞產(chǎn)生的碎片

圖4細胞受到黑膠蟲污染圖

5、原蟲*該污染在顯微鏡下易觀察到,輕微活動,細胞生長但繁殖速度明顯減慢,培養(yǎng)基產(chǎn)生渾濁,細胞狀態(tài),邊緣不清楚,細胞不透亮。其能與細胞共生爭奪培養(yǎng)基營養(yǎng),當(dāng)?shù)竭_一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長,導(dǎo)致細胞死亡*對于原蟲污染傾向于是細菌類污染

圖5細胞受到原蟲污染圖

6、病毒由于病毒過小導(dǎo)致培養(yǎng)過程中難以觀察。由于在獲得原代細胞過程中沒有*除去潛在的病毒,導(dǎo)致病毒污染。盡管病毒污染細胞原代培養(yǎng)不會造成太大影響,但對下游工業(yè)生產(chǎn)如生產(chǎn)疫苗等造成安全隱患,因此需要盡量去除。      

圖6:病毒入侵猴肝臟細胞層圖像(圖 源自悉尼大學(xué))

7非同種細胞污染 這個主要指不同種類細胞產(chǎn)生的交叉污染,由于細胞培養(yǎng)過程中不同種類細胞株 所需器材和溶液沒有嚴格分開,導(dǎo)致細胞交叉污染。據(jù)報道,世界上已有種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效,因此避免非同種細胞污染也需要引起實驗者的重視。

7細胞受到非同種細胞污染圖

攻略二:污染的去除

細胞培養(yǎng)過程中難免會遇到細胞污染,怎么辦???

多數(shù)污染是難*去除,如果污染細胞非珍貴且有備用,舍棄;

找到污染源后并清除掉,可復(fù)蘇凍存細胞或重新購置細胞培養(yǎng)

若污染細胞很珍貴,一時難覓新,針對不同污染小翊給您如下建議。


 

攻略三:污染的預(yù)防

細胞污染是比較難處理,因此預(yù)防就顯的尤為重要。對于預(yù)防可從以下幾方面著手:

1、 使用抗生素對細胞培養(yǎng)基使用雙抗(在細胞培養(yǎng)基中推薦青霉素的工作濃度為100U/ml,鏈霉素為0.1mg/ml。

2、 支原體預(yù)防:可以使用支原體預(yù)防試劑預(yù)防支原體的污染產(chǎn)生。

3、培養(yǎng)器材、用品需消毒滅菌細胞培養(yǎng)所用器材要清洗消毒,各種溶液滅菌處理。

4、實驗操作者的無菌意識

①洗手消毒,穿隔離衣。工作開始時要用酒精棉球擦手并對器皿進行酒精擦拭;

②操作需在生物安全柜內(nèi)并佩戴口罩;

③盡量使用一次性無菌器材操作,對于多次使用的需實高壓滅菌處理。實驗完畢用酒精擦拭操作臺面。

5、細胞交叉污染的預(yù)防

①一次對多種細胞培養(yǎng)操作時,所用器具要嚴格區(qū)分;

在進行換液或傳代操作時盡量避免液體濺出污染其他細胞;

③新購細胞應(yīng)及時留種凍存,如遇污染可重新復(fù)蘇。

6、無菌室或細胞房的污染預(yù)防

①使用0.1%新潔爾滅對細胞房或無菌室進行全面*擦洗;

②使用紫外燈長時間(0.5-2h)照射;

③使用甲醛熏蒸法。



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