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技術(shù)革新：聚焦翌圣生物熱啟動Taq酶雙封閉抗體
非特異擴增是PCR實驗中的常見問題，非特異擴增直接影響檢測結(jié)果的判讀并且會導致擴增靈敏度下降，甚至目標片段的得率下降等。此外，檢測試劑的穩(wěn)定性也是核酸檢測行業(yè)人格外關(guān)注的問題，不管是長期儲存穩(wěn)定性還是短期偏離正常保存條件的穩(wěn)定性，都直接影響檢測結(jié)果的有效性。
翌圣生物科技（上海）股份有限公司（以下簡稱“翌圣生物"）匠心開發(fā)出熱啟動Taq酶雙封閉抗體，通過同時封閉Taq酶的聚合酶活性及外切酶活性來有效提高擴增的特異性及試劑的穩(wěn)定性。
PART 01
Taq酶雙封閉抗體封閉原理
傳統(tǒng)的Taq DNA聚合酶抗體可以有效抑制Taq酶的聚合酶活性，從而避免錯配或引物二聚體引起的非特異性擴增。然而Taq酶除了具有5'→3'聚合酶活性，還有5'→3'核酸外切酶活性，這部分外切酶活性可能會在低溫時導致錯配探針或其它物料降解，造成非特異信號。翌圣生物開發(fā)的熱啟動Taq酶雙封閉抗體不僅可以封閉Taq酶的有5'→3'聚合酶活性，還能同時封閉Taq酶的5'→3'外切酶活性，雙管齊下，既能有效防止錯配或引物二聚體引起的非特異性擴增，又能防止物料降解產(chǎn)生非特異信號，雙重提升試劑的穩(wěn)定性。
圖1. 翌圣雙封閉抗體封閉原理示意圖
圖中高亮部分為Taq DNA聚合酶5'→3'聚合酶活性結(jié)構(gòu)域和5'→3'核酸外切酶活性結(jié)構(gòu)域，翌圣雙封閉抗體含兩種抗體，可同時封閉Taq DNA聚合酶的5'→3'聚合酶活性和5'→3'核酸外切酶活性
PART 02
Taq酶雙封閉抗體使用方案
翌圣生物Taq酶雙封閉抗體不僅可封閉野生型Taq酶，對于多種突變體Taq酶亦可適用，封閉之后的熱啟動Taq酶可以正常保存至-20℃。
1 µL抗體（5 mg/mL）可封閉20-50 U Taq DNA聚合酶：
• 小樣室溫（25℃）旋轉(zhuǎn)混勻孵育30 min
• 大樣室溫（25℃）旋轉(zhuǎn)混勻孵育2~3 h
PART 03
Taq酶雙封閉抗體性能展示
1 雙封閉抗體有效封閉Taq DNA聚合酶外切酶活性
將合成的引物探針分別配于未封閉以及雙封閉抗體封閉的Taq DNA聚合酶的反應液中，40℃反應，檢測兩者熒光信號。
圖2. 雙封閉抗體外切酶活性封閉效率檢測
黃色：未封閉的Taq DNA聚合酶組；紫色：雙封閉抗體封閉的Taq DNA聚合酶組
由圖2可以看出雙封閉抗體可有效封閉Taq DNA聚合酶的外切酶活性。
2 使用雙封閉抗體分型準確，靈敏度更高
分別用翌圣生物雙封閉抗體以及T公司抗體對Taq酶封閉后通過ARMS-PCR技術(shù)檢測陽性樣本。
圖3. ARMS-PCR擴增曲線圖
藍色：T公司封閉抗體封閉；紅色：翌圣雙封閉抗體封閉
由圖3可以看到翌圣生物雙封閉抗體封閉的Taq酶在ARMS-PCR擴增中分型準確，靈敏度更高。
3 雙封閉抗體有效提升檢測試劑穩(wěn)定性
用傳統(tǒng)封閉抗體與雙封閉抗體分別封閉Taq DNA聚合酶，配置成含引物探針的全預混液，在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天，擴增10000拷貝ASFV質(zhì)粒，觀察擴增曲線和Ct值變化，對比傳統(tǒng)封閉抗體和雙封閉抗體對全預混反應液穩(wěn)定性的作用。
圖4. 傳統(tǒng)封閉抗體(A)、雙封閉抗體(B)封閉反應液擴增10000拷貝ASFV質(zhì)粒擴增曲線圖
藍色：4℃放置10天；紅色：4℃放置0天（對照）
由圖4可以看出，雙封閉抗體比傳統(tǒng)封閉抗體更能保持反應液穩(wěn)定，有效提升檢測試劑穩(wěn)定性。雙封閉抗體封閉含引物探針全預混液4℃放置10天擴增曲線和Ct值無明顯變化。
圖5. 傳統(tǒng)封閉抗體(A)、雙封閉抗體(B)封閉反應液擴增10000拷貝ASFV質(zhì)粒擴增曲線圖
藍色：37℃放置5天 ；綠色：37℃放置3天；黃色：37℃放置1天 ； 紅色：37℃放置0天（對照）
由圖5可以看出，雙封閉抗體比傳統(tǒng)封閉抗體更能保持反應液穩(wěn)定，有效提升檢測試劑穩(wěn)定性。雙封閉抗體封閉含引物探針全預混液37℃放置1、3、5天Ct值差小于0.2。
4 雙封閉抗體幫助解決基線上漂問題
某些引物配合特定buffer和儀器時，會出現(xiàn)基線上漂的情況。翌圣生物嘗試多種方法改善基線問題，發(fā)現(xiàn)雙封閉抗體更有利于基線平穩(wěn)。
圖6. N基因(A)、ACT基因(B)擴增曲線圖
紅色：傳統(tǒng)封閉抗體封閉；綠色：雙封閉抗體封閉
由圖6可以看出特定引物和buffer下，使用雙封閉抗體可幫助解決基線上漂問題。
5 使用雙封閉抗體獲得良好線性
用雙封閉抗體封閉的反應液擴增100000、10000、1000、100拷貝ASFV/ACT雙質(zhì)粒，制作標準曲線。
圖7. 雙封閉反應液制作ASFV基因(A)、ACT基因(B)標準曲線圖
由圖7可以看到，ASFV基因標準曲線R2為0.998，擴增效率為98.848%；ACT基因標準曲線R2為0.998，擴增效率為98.113%，兩者線性均良好，且均無非特異性擴增。
6 雙封閉抗體可快速釋放酶活
分別用進口T公司抗體和翌圣生物雙封閉抗體封閉Taq酶，并在95℃下熱激20 s，檢測酶活?？梢钥吹?5℃熱激 20 s后，翌圣生物雙封閉抗體可釋放95%以上的酶活，與T公司抗體相當。
原酶 | 翌圣生物雙封閉抗體（95℃，20 s） | T公司抗體（95℃，20 s） | |
酶活-U/μL | 2.15 | 2.1 | 2.2 |
7 雙封閉抗體可封閉多種類型Taq酶
用翌圣生物雙封閉抗體（Cat#31303）分別封閉三種類型Taq酶（野生型+2種突變型），封閉比例為1μg：5U，測量熒光值以及封閉效率?？梢钥吹?，對于不同類型的Taq酶，翌圣生物雙封閉抗體（Cat#31303）封閉效果均較好。
熒光值 | 封閉效率 | |
空白 | 6461.74 | |
原酶-Taq000 | 56221.33 | |
原酶-Taq019E | 50819.64 | |
原酶-Taq019H | 56466.33 | |
31303-Taq000 | 7949.68 | 97.01% |
31303-Taq019E | 8267.35 | 95.93% |
31303-Taq019H | 8015.47 | 96.90% |
8 Yeasen雙封閉抗體無小鼠基因組殘留
以水為模板作為陰性對照，小鼠基因組為模板作為陽性對照，擴增不同批次的31303，觀察條帶，發(fā)現(xiàn)樣品未擴增出目的片段，說明抗體不存在小鼠基因組殘留。
圖8. 小鼠基因組殘留檢測圖
注：-為陰性對照，+為陽性對照，1-5為31303不同批次樣品
PART 04
翌圣生物Taq酶抗體庫，滿足您的多樣化需求
創(chuàng)新合作模式下的定制化封閉抗體篩選，翌圣生物Taq酶抗體庫給您多種選擇！
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PART 05
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody
| 31303ES60 | 100 μg | 1153.00 | 229.00 |
31303ES80 | 1 mg | 3653.00 | 1479.00 | |
31303ES90 | 5 mg | 14653.00 | 6159.00 | |
31303ES92 | 10 mg | 26353.00 | 11189.00 | |
31303ES93 | 100 mg | 231753.00 | 74599.00 | |
31303ES94 | 1000 mg | 1969552.00 | 499999.00 |
