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試用 | 引物二聚體太多?檢出率低?試試翌圣引物熱啟動(dòng)結(jié)合蛋白!

2025-6-16  閱讀(86)

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在PCR技術(shù)的發(fā)展歷程中,熱啟動(dòng)技術(shù)的出現(xiàn)無疑是一次革命性突破。常規(guī)PCR技術(shù)在反應(yīng)體系配制階段,由于DNA聚合酶在低溫環(huán)境下已具備活性,極易與引物、模板發(fā)生非特異性結(jié)合,從而產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體。這些“副產(chǎn)物"不僅干擾目標(biāo)產(chǎn)物的擴(kuò)增,還會(huì)嚴(yán)重降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性,導(dǎo)致后續(xù)數(shù)據(jù)分析出現(xiàn)偏差甚至錯(cuò)誤。

 

熱啟動(dòng)技術(shù)通過的溫度依賴性激活機(jī)制,從根源上解決了這一難題。在反應(yīng)體系配制時(shí),借助物理或化學(xué)修飾手段,暫時(shí)“凍結(jié)"DNA聚合酶的活性,使其無法在低溫下啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)。直到反應(yīng)溫度升至特定閾值,聚合酶的活性才被精準(zhǔn)釋放,開始特異性地識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)模板,進(jìn)行高效、準(zhǔn)確的DNA擴(kuò)增。這種精準(zhǔn)的溫度控制,規(guī)避了低溫環(huán)境下的非特異性條帶和引物二聚體的生成,顯著提升了PCR反應(yīng)的特異性。正因如此,熱啟動(dòng)PCR已成為提升PCR特異性的金標(biāo)準(zhǔn),但傳統(tǒng)熱啟動(dòng)技術(shù)需針對(duì)特定DNA聚合酶篩選適配體或抗體,存在研發(fā)周期長(zhǎng)、操作繁瑣等局限。

 


<點(diǎn)擊查看大圖>

 

相比之下,引物封閉熱啟動(dòng)技術(shù)獨(dú)辟蹊徑,不再聚焦于聚合酶活性“凍結(jié)",而是通過高親和性DNA結(jié)合蛋白精準(zhǔn)捕獲引物,從根本上突破了傳統(tǒng)技術(shù)依賴聚合酶修飾的桎梏。基于引物封閉原理,從源頭上阻斷引物間的錯(cuò)誤結(jié)合,解決傳統(tǒng)PCR中引物二聚體形成以及非特異性產(chǎn)物生成的難題。該技術(shù)既規(guī)避了復(fù)雜冗長(zhǎng)的篩選流程,又極大提升了熱啟動(dòng)技術(shù)的應(yīng)用便捷性與反應(yīng)特異性,為PCR技術(shù)的高效、精準(zhǔn)應(yīng)用開辟了新路徑。

 

圖1. 引物封閉熱啟動(dòng)技術(shù)在PCR擴(kuò)增技術(shù)中的原理圖示意[2]

 

性能展示

HotStart-Primer Binding Protein (Cat#14563)

翌圣生物全新研發(fā)的HotStart-Primer Binding Protein (Cat#14563)能夠在低溫下可與引物結(jié)合,將引物與Taq DNA聚合酶有效隔離,使其無法被聚合酶利用,從而高效抑制低溫條件下非特異性引物延伸產(chǎn)物及引物二聚體的形成,能夠顯著提升PCR反應(yīng)的特異性和擴(kuò)增效率。

 

有效抑制引物二聚體形成,提高檢出率

通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)評(píng)估翌圣生物HotStart-Primer Binding Protein與進(jìn)口品牌Supplier A同類產(chǎn)品對(duì)PCR反應(yīng)中引物二聚體的抑制效果。結(jié)果顯示,兩種產(chǎn)品均能有效減少引物二聚體形成,并顯著提高目標(biāo)序列的擴(kuò)增效率,表明熱啟動(dòng)蛋白技術(shù)可顯著改善PCR反應(yīng)特異性。


 

圖2. 翌圣HotStart-Primer Binding Protein提升PCR反應(yīng)特異性數(shù)據(jù)展示

 

新品,福利大放送!現(xiàn)開放5個(gè)免費(fèi)試用名額,先到先得!只需掃描下方二維碼,聯(lián)系工作人員,即可輕松申領(lǐng)試用產(chǎn)品,開啟高效科研之旅!

 

 

活動(dòng)細(xì)則:

1、活動(dòng)時(shí)間:即日起-6月30日

2、活動(dòng)名額有限,每位客戶限一套。

 

 

相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品類型

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

引物熱啟動(dòng)結(jié)合蛋白

HotStart-Primer Binding Protein

14563ES

Taq酶雙封閉抗體

Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody

31303ES

Taq酶

Hieff UNICON UCF. ME® Advanced Hotstart Taq DNA Polymerase

14321ES

逆轉(zhuǎn)錄酶

Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase

14614ES

熱敏UDG酶

UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG), heat-labile

14466ES

鼠源RNase抑制劑

UCF.ME® Murine RNase Inhibitor

14672ES

 

 

參考文獻(xiàn):

[1] Paul N, Shum J, Le T. Hot start PCR[M]//RT-PCR Protocols: Second Edition. Totowa, NJ: Humana Press, 2010: 301-318.

[2] Kubu C J. HotStart-IT®: A novel hot start PCR method based on primer sequestration[J]. BioTechniques, 2008, 44(2): 275-277.



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