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腫瘤發(fā)病和死亡情況異常嚴(yán)峻，其精準(zhǔn)治療不容忽視，因此近年來各類腫瘤機(jī)制研究和創(chuàng)新療法開發(fā)的熱度居高不下。作為銜接基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，腫瘤動(dòng)物模型在解析腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移機(jī)制以及藥物研發(fā)與評(píng)估中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。
腫瘤藥效研究
抗腫瘤藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià)是小動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)的基礎(chǔ)應(yīng)用之一，利用熒光素酶標(biāo)記腫瘤細(xì)胞，并移植入動(dòng)物體內(nèi)建立腫瘤疾病動(dòng)物模型，給藥后應(yīng)用小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)觀測(cè)腫瘤光學(xué)信號(hào)隨時(shí)間的變化情況，進(jìn)而評(píng)價(jià)不同藥物、特定的給藥途徑、時(shí)間、劑量等給藥策略對(duì)于腫瘤的治療效果。
相較于分批處死動(dòng)物以獲取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的傳統(tǒng)方法，活體成像技術(shù)利用細(xì)胞和分子水平的定性定量研究進(jìn)行觀測(cè)記錄，在構(gòu)建原位成瘤CDX模型相關(guān)研究過程中，更便于跟蹤疾病進(jìn)展及腫瘤轉(zhuǎn)移情況，使得腫瘤模型的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)不似以往受限。
實(shí)驗(yàn)流程方法
確定使用的螢光素酶
常見的螢光素酶有螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase，F(xiàn)luc），海腎螢光素酶（Renilla luciferase，Rluc），Gaussia螢光素酶。它們?cè)谔囟ǖ臈l件下都可以催化各自的底物發(fā)出對(duì)應(yīng)的光，這個(gè)過程無(wú)需激發(fā)器激發(fā)。其中，F(xiàn)luc是使用廣泛的螢光素酶。
構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)螢光素酶的細(xì)胞株
將帶有Fluc基因的載體通過轉(zhuǎn)染試劑等方法以一定手段轉(zhuǎn)入研究的腫瘤細(xì)胞中，并通過篩選得到穩(wěn)定表達(dá)Fluc的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。
皮下成瘤或原位成瘤
成功構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株后，即可進(jìn)行動(dòng)物移植模型構(gòu)建。此時(shí)一般是將Fluc細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)。
常見的實(shí)驗(yàn)操作如下：
1. 準(zhǔn)備對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的、細(xì)胞密度達(dá)80 - 90%左右的Fluc腫瘤細(xì)胞。
2. 將細(xì)胞懸液和Ceturegel™基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例進(jìn)行稀釋。
3. 左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩處皮下注射.
活體成像觀測(cè)
細(xì)胞接種一段時(shí)間后，可以進(jìn)行活體成像檢測(cè)。首先麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物， 接著注射底物熒光素，最佳的檢測(cè)時(shí)間是在注射后10 - 15 min之間。但需要注意的是，對(duì)于不同的動(dòng)物模型，發(fā)光動(dòng)力學(xué)過程并不全一致，最好先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果展示
注：探究抗腫瘤藥物HKB99對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的影響。（DOI: 10.1016/j.cmet.2019.09.014?）
產(chǎn)品詳情
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Ceturegel®Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5 mL/10 mL |
D-Luciferin,Sodium Salt | 40901ES01/02/03/08 | 100 mg/500 mg/1 g/5 g |
D-Luciferin,Potassium Salt | 40902ES01/02/03/09 | 100 mg/500 mg/1 g/5 g |
D-Luciferin Firefly,Free Acid | 40903ES01/02/03 | 100 mg/500 mg/1g |
Coelenterazine Native | 40904ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5 mg |
Coelenterazine 400a | 40905ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
Coelenterazine h 腔腸素h | 40906ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5 mg |
Coelenterazine f | 40908ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
