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基質(zhì)膠應(yīng)用(4)- 皮下成瘤與活體成像,助力腫瘤藥效研究

2025-7-3  閱讀(73)

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腫瘤發(fā)病和死亡情況異常嚴(yán)峻,其精準(zhǔn)治療不容忽視,因此近年來各類腫瘤機(jī)制研究和創(chuàng)新療法開發(fā)的熱度居高不下。作為銜接基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié),腫瘤動(dòng)物模型在解析腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移機(jī)制以及藥物研發(fā)與評(píng)估中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

 


腫瘤藥效研究


抗腫瘤藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià)是小動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)的基礎(chǔ)應(yīng)用之一,利用熒光素酶標(biāo)記腫瘤細(xì)胞,并移植入動(dòng)物體內(nèi)建立腫瘤疾病動(dòng)物模型,給藥后應(yīng)用小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)觀測(cè)腫瘤光學(xué)信號(hào)隨時(shí)間的變化情況,進(jìn)而評(píng)價(jià)不同藥物、特定的給藥途徑、時(shí)間、劑量等給藥策略對(duì)于腫瘤的治療效果。

 

相較于分批處死動(dòng)物以獲取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的傳統(tǒng)方法,活體成像技術(shù)利用細(xì)胞和分子水平的定性定量研究進(jìn)行觀測(cè)記錄,在構(gòu)建原位成瘤CDX模型相關(guān)研究過程中,更便于跟蹤疾病進(jìn)展及腫瘤轉(zhuǎn)移情況,使得腫瘤模型的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)不似以往受限。

 

實(shí)驗(yàn)流程方法

01

確定使用的螢光素酶

常見的螢光素酶有螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase,F(xiàn)luc),海腎螢光素酶(Renilla luciferase,Rluc),Gaussia螢光素酶。它們?cè)谔囟ǖ臈l件下都可以催化各自的底物發(fā)出對(duì)應(yīng)的光,這個(gè)過程無(wú)需激發(fā)器激發(fā)。其中,F(xiàn)luc是使用廣泛的螢光素酶。

 

02

構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)螢光素酶的細(xì)胞株

將帶有Fluc基因的載體通過轉(zhuǎn)染試劑等方法以一定手段轉(zhuǎn)入研究的腫瘤細(xì)胞中,并通過篩選得到穩(wěn)定表達(dá)Fluc的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

 

03

皮下成瘤或原位成瘤

成功構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株后,即可進(jìn)行動(dòng)物移植模型構(gòu)建。此時(shí)一般是將Fluc細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)。

 

常見的實(shí)驗(yàn)操作如下:

1. 準(zhǔn)備對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的、細(xì)胞密度達(dá)80 - 90%左右的Fluc腫瘤細(xì)胞。

2. 將細(xì)胞懸液和Ceturegel™基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例進(jìn)行稀釋。

3. 左手抓取固定裸鼠,于裸鼠右肩處皮下注射.

 

04

活體成像觀測(cè)

細(xì)胞接種一段時(shí)間后,可以進(jìn)行活體成像檢測(cè)。首先麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物, 接著注射底物熒光素,最佳的檢測(cè)時(shí)間是在注射后10 - 15 min之間。但需要注意的是,對(duì)于不同的動(dòng)物模型,發(fā)光動(dòng)力學(xué)過程并不全一致,最好先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

 

結(jié)果展示

注:探究抗腫瘤藥物HKB99對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的影響。(DOI: 10.1016/j.cmet.2019.09.014?

 

產(chǎn)品詳情


產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

Ceturegel®Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠

40183ES08/10

5 mL/10 mL

D-Luciferin,Sodium Salt
D-熒光素鈉鹽

40901ES01/02/03/08

100 mg/500 mg/1 g/5 g

D-Luciferin,Potassium Salt
D-熒光素鉀鹽

40902ES01/02/03/09

100 mg/500 mg/1 g/5 g

D-Luciferin Firefly,Free Acid
D-螢火蟲熒光素,游離酸

40903ES01/02/03

100 mg/500 mg/1g

Coelenterazine Native
天然腔腸素

40904ES02/03/08

1×500 μg/2×500 μg/5 mg

Coelenterazine 400a
腔腸素400a

40905ES02/03

1×500 μg/2×500 μg

Coelenterazine h 腔腸素h

40906ES02/03/08

1×500 μg/2×500 μg/5 mg

Coelenterazine f
腔腸素f

40908ES02/03

1×500 μg/2×500 μg



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