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供應(yīng)簡介

HieffTM Taq DNA Polymerase是嗜熱性Thermus aquaticus表達的熱穩(wěn)定重組型DNA聚合酶，分子量為94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，無3’→5’外切酶活性。擴增產(chǎn)物具有3′-dA，可直接用于TA克隆。

詳細介紹

Hieff^TM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格	價格（元）
Hieff^TMTaq DNA Polymerase DNA聚合酶	10101ES80	1000 U	109.00
Hieff^TMTaq DNA Polymerase DNA聚合酶	10101ES90	5×1000 U	459.00

產(chǎn)品描述

Hieff^TM Taq DNA Polymerase是嗜熱性Thermus aquaticus表達的熱穩(wěn)定重組型DNA聚合酶，分子量為94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，無3’→5’外切酶活性。擴增產(chǎn)物具有3′-dA，可直接用于TA克隆。

產(chǎn)品組分

編號	組分	產(chǎn)品編號/規(guī)格
編號	組分	10101ES80（1000 U）	10101ES90（5×1000 U）
10101-A	10×Taq Buffer (Mg²⁺ Free)	1 mL×4	1 mL×20
10101-B	25 mM MgCl₂	1 mL×2	1 mL×10
10101-C	Hieff^TM Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	200 μL	200 μL×5

產(chǎn)品應(yīng)用

基因型鑒定、菌落PCR等常規(guī)PCR。

活性定義

用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。

質(zhì)量控制

核酸外切酶殘留檢測：20 μL反應(yīng)體系，10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ，74 ºC下孵育1 h，DNA的電泳譜帶無變化。

核酸內(nèi)切酶殘留檢測：20 μL反應(yīng)體系，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74 ºC下孵育1 h，DNA的電泳譜帶無變化。

大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μL體系中，加入2 U本品，以無菌ddH₂O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環(huán)后擴增產(chǎn)物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20 ºC保存。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

PCR反應(yīng)體系（冰上配制）

組分	體積（μL）	終濃度
ddH₂O	to 50	-
10×Taq Buffer(Mg²⁺ Free)	5	1×
25 mM MgCl₂	3	1.5 mM
dNTP Mix (10 mM each)	1 μL	0.2 mM
模板DNA	optional	-
引物1(10 μM)	2 μL	0.4 mM
引物2(10 μM)	2 μL	0.4 mM
Hieff^TM Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.4 μL	0.04 U/μL

【注】：1）Mg²⁺ 終濃度：Mg²⁺*濃度為1.5-2 mM，如有需要，可0.2-0.5 mM為間隔向上摸索Mg²⁺*使用濃度。

2）聚合酶添加：室溫下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，為了防止非特異性擴增，建議將聚合酶在zui后一步加到反應(yīng)體系中。

3）聚合酶濃度：推薦使用0.04 U/μL?？梢栽?/span>0.025-0.04 U/ μL之間進行優(yōu)化。

4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：

模板種類	擴增片段
基因組DNA	50 ng～100 ng
質(zhì)粒DNA	10 pg～20 ng
cDNA	1~5 μL（不超過反應(yīng)體系的1/10）

PCR擴增程序

循環(huán)步驟	溫度（ºC）	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94	30 sec-5 min	1
變性	94	30 sec	35
退火	50-60	30 sec
延伸	72	60 sec/kb
終延伸	72	10 min	1

【注】：1）預(yù)變性溫度和時間：推薦使用94℃。預(yù)變性推薦時間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。

2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的zui適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。

3）擴增產(chǎn)物：請將PCR擴增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止DNA發(fā)生降解。

HB171127

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