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上海信帆生物科技有限公司生物實驗室，通過ELISA實驗探討體外條件下分離、純化大鼠骨髓間充質干細胞的有效方法,對所獲細胞進行培養(yǎng),觀察細胞的生物學特性，以及用GENOMIC試劑盒檢測Ⅰ型膠原蛋白含量對骨髓間充質干細胞成骨分化的作用。
此方法實驗由實驗室的王主任和張研究院負責進行。首先采用密度梯度離心法分離大鼠骨髓間充質干細胞,用貼壁培養(yǎng)法對所獲細胞進行培養(yǎng)、傳代、純化和擴增,觀察細胞的生物學特性,倒置相差顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學特征,透射電鏡觀察細胞的超微結構,流式細胞術鑒定細胞表面標志物;將分離純化的大鼠骨髓間充質干細胞培養(yǎng)于Ⅰ型膠原蛋白上面,對細胞的堿性磷酸酶表達、細胞礦化形成鈣化結節(jié)的能力進行測定。 結果分離的細胞1天后*貼壁,貼壁的細胞平均10d后形成細胞克隆,所獲細胞形態(tài)均一,呈成纖維細胞樣生長,細胞穩(wěn)定表達骨髓間充質干細胞表面標志物。在Ⅰ型膠原蛋白上面培養(yǎng)后,細胞堿性磷酸酶顯著表達,Von.Kossa染色可見礦化結節(jié)形成。
結論密度梯度離心法分離,貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)所得細胞,可以有效分離、純化大鼠骨髓間充質干細胞。用此種方法獲得的細胞具有骨髓間充質干細胞的特性。Ⅰ型膠原蛋白能夠促進大鼠骨髓間充質干細胞的成骨分化。
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