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臺(tái)式低溫高速離心機(jī)是實(shí)驗(yàn)室zui常見的*儀器，今天由上海趙迪技術(shù)人員向大家介紹臺(tái)式低溫高速離心機(jī)如何提取與制備蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)樣品制備
　　
　　秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取按Davermal等（1986）的方法進(jìn)行。
　　
　　100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40（聚 乙 烯吡咯烷酮）及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巰基乙醇），混勻，-20℃沉淀1小時(shí)，4℃，15000r/min離心15min，棄上清，沉淀復(fù)溶于1.5ml冷丙酮（含10mMβ-巰基乙醇），再于-20℃沉淀1小時(shí)，同上離心棄上清，（有必要再用80％丙酮（含10mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。
　　
　　按每mg干粉加入20μl（可調(diào)）UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸鉀，1.25%SDS，0.5%DTT（二硫蘇糖醇），2%Ampholine（AmershamPharmaciaBiotechInc，pH3.5-10），6%TritonX-100]，37℃溫育30min，期間攪動(dòng)幾次，28度（溫度低，高濃度的尿素會(huì)讓溶液結(jié)冰）16000r/min離心15min，離心力越大時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)越好！上清即可上樣電泳?；蛘?70度保存
　　
　　植物根中蛋白質(zhì)的抽取
　　
　?。?）sample,液氮研磨
　　
　?。?）裝1.5mlcentrifuge用tube
　　
　?。?）加1MKH2PO4K2HPO4700ul
　　
　　（4）12000rpm,4度,10-15minite
　　
　?。?）取上層液，蛋白質(zhì)就在里面
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