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酵母菌破壁方法的革新
閱讀：3329發(fā)布時間：2017-3-22
酵母菌是基因表達研究和重組蛋白生產(chǎn)的通用宿主。然而，傳統(tǒng)酶解法進行酵母mRNA和內容蛋白提取通常非常困難。我們以細胞總RNA提取為例，對各種酵母破壁方法進行比較。我們用不同的方法對酵母菌破壁，然后用Trizol試劑進行RNA的提取，zui后進行電泳檢測，發(fā)現(xiàn)不同破壁方法效果如下：
SPEX公司Freezer/Mill冷凍研磨儀將上述液氮研磨法進一步改良，使酵母破壁這樣的實驗更加簡單，無人值守即可完成。將樣品裝入密閉的研磨容器，浸入液氮，采用電磁振蕩技術，電磁往復驅動鋼制撞子，振蕩裝機樣品，動能慣性更大，實現(xiàn)高動能撞子大面積撞擊，快速粉碎研磨。過程中，樣品始終處于液氮溫度（-196°C）。
實驗方法：
*步：將樣品研磨罐預冷凍。
第二步：將酵母菌液加入液氮中，控制速度，使菌液進入液氮中后形成小顆粒。將菌體液氮顆粒轉入研磨罐中。放入冷凍研磨儀的樣品倉。
第三步：設置研磨程序，預冷10-15min，研磨2min，15個循環(huán)，兩次研磨之間間歇1min。
實驗結果：
經(jīng)檢驗，用此法能使得90%以上的酵母細胞破壁。酵母的RNA和細胞內蛋白保持高活性。
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