紫外分光光度法測(cè)定維生素A的含量

1．原理

維生素A的異丙醇溶液在325 nm波長(zhǎng)下有zui大吸收峰，其吸光度與維生素A的含量成正比。

本法的靈敏度較比色法高，可測(cè)定維生素A含量低于5μg／g的樣品。主要缺點(diǎn)是在維生素Azui大吸收波長(zhǎng)325 nm附近許多其他化合物也有吸收，干擾測(cè)定，故本法適用于透明魚(yú)油，維生素A的濃縮物等純度較高的樣品。對(duì)于一般樣品，測(cè)定前必須先將脂肪抽提出來(lái)進(jìn)行皂化，萃取其不皂化部分，再經(jīng)柱層析除去干擾物。

2．儀器

3．試劑

①異丙醇。

②維生素A標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取1 g相當(dāng)于50 000單位維生素A的濃魚(yú)肝油0．1000 g，加異丙醇溶解，定容至125 mL。此溶液1 mL相當(dāng)于40單位(即40 IU．mL-1)。

4.測(cè)定步驟

①標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：分別取維生素A標(biāo)準(zhǔn)溶液(40 IU·mL-1)O．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、4·0 mL，于10 mL棕色容量瓶中，用異丙醇定容。以空白液調(diào)儀器零點(diǎn)，于紫外分光光度計(jì)上在325 nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

②樣品測(cè)定：稱(chēng)取適量樣品，按照三氯化銻比色法進(jìn)行皂化、提取、洗滌、濃縮、蒸發(fā)醚層后，迅速用異丙醇溶解并移人50 mL容量瓶中，用異丙醇定容，于紫外分光光度計(jì)325nm處測(cè)定其吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出相當(dāng)?shù)木S生素A含量。

5．計(jì)算

X=[(c*V)/m]*100

式中：X——樣品維生素A的含量，IU·(100 g) -1；

   c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得的維生素A含量，IU·mL-1；    ．

   V——樣品的異丙醇溶液體積，mL；

   m——樣品質(zhì)量，g。