動(dòng)物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留檢測(cè)的固相萃取方法

（PolyClean X-HLB）

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h2>

本法為以 Polyclean X-HLB（60mg/3mL）柱開發(fā)的針對(duì)動(dòng)物源食品（豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品）中硝基呋喃類代謝物殘留檢測(cè)的樣本前處理凈化方法，Polyclean  X-HLB

（60mg/3mL）柱凈化效果良好，回收率滿足測(cè)試要求，重現(xiàn)性好，與廠商同型號(hào)柱性能相當(dāng)。目標(biāo)物采用反相液相色譜-紫外為檢測(cè)手段。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

四種硝基呋喃類代謝物：呋喃它酮代謝物 5-嗎啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ， CAS:43056-63-9）、呋喃西林代謝物氨基脲（縮寫 SEM，CAS:563-41-7）、呋喃妥因代謝物 1-氨基-2-內(nèi)酰脲（縮寫AHD，2827-56-7）和呋喃唑酮代謝物 3-氨基-2-噁唑烷基酮（縮寫AOZ,80-65-9）。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于動(dòng)物源性食品包括豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品（魚類、蝦蟹類和貝類）中硝基呋喃類代謝物殘留檢測(cè)。

四、參考標(biāo)準(zhǔn)

參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 20752-2006 豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》和農(nóng)業(yè)部公告《農(nóng)業(yè)部 1077 號(hào)公告-2-2008 水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定》

五、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical Polyclean X-HLB 固相萃取柱 60mg/3mL。六、實(shí)驗(yàn)方法

1、 樣品待測(cè)溶液制備

（1）樣品稱取脫脂

稱取待測(cè)樣品 2g（到 0.01g），置于 50mL 離心管中加入 10mL 甲醇-水混合物（2+1），振蕩混勻 10min，4000r/min 離心 10min，吸取清液棄掉、離心管中試樣備用。

（2）水解衍生化

向上述離心管中加入 20mL0.2mol/L 鹽酸，振蕩混勻 10min，后加入 0.4mL 0.05mol/L 2-硝基苯甲醛（0.075g  2-硝基苯甲醛溶于 10mL  二甲亞砜），渦旋混勻 1min，置于 37℃恒溫振蕩器水浴中避光反應(yīng) 16h。

將上述衍生液，放置至室溫，加入 5mL0.1mol/L 磷酸氫二甲溶液，用 1mol/L NaOH 調(diào)節(jié) pH 到約 7.4，4000r/min 離心 10min，上清液（對(duì)脂肪含量多的試樣，可加入 5mL 正己烷，振蕩 2min，4000r/min 離心5min 吸取并棄掉正己烷）備 HLB 柱萃取凈化用。

2、活化

依次用 5mL 甲醇、10mL 水活化。

3、上樣和洗脫

取上述備用液控制流速小于 2 mL/min 過柱。待樣液全部通過后用 10mL 水淋洗上樣柱， 棄去全部流出液并真空抽干，zui后用 5 mL 乙酸乙酯洗脫柱子上的待測(cè)成分。

4、重新溶解

收集洗脫液，于 40 ℃氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入 1.0 mL 乙腈/水（1/2，V/V）溶液溶解殘余物混勻，0.22 μm 濾膜過濾，供液相色譜測(cè)定。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

檢測(cè)器：Waters 2487  紫外雙波長(zhǎng)檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm

流動(dòng)相：A-乙腈    B- 0.01mmol/L 乙酸銨（0.77g 乙酸銨，1000mL 水溶解，甲酸調(diào) pH

3.5  ）

洗脫方式：梯度洗脫，梯度條件如下：

柱溫：30℃     流速：1.0 mL/min             進(jìn)樣量：20μL七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結(jié)果

表 1   添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結(jié)果

2、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的紫外檢測(cè)色譜圖

圖 1   添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉中硝基呋喃代謝物衍生物檢測(cè)的液相色譜圖