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目的 ：

建立微生物鑒定標準操作規(guī)程，使其規(guī)范化、合理化

范圍：

環(huán)境監(jiān)測、生產(chǎn)設備、藥品進廠原料及成品微生物檢測和水質檢測過程中分離得到的微生物及工作菌株。

職責：

1、 質量控制部檢驗人員對具體操作負責；

2 、質量保證部負責監(jiān)督本規(guī)程的執(zhí)行。 

內容 ：

1、概述 
微生物是對藥品原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品造成污染的重要因素，也是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格、直接或間接對人類造成危害的重要因素。因此，對從藥品原料、生產(chǎn)環(huán)境、檢測環(huán)境、設備和成品微生物檢測過程中分離得到的污染微生物進行鑒定，是十分必要的，也可為檢驗和生產(chǎn)提供有效的依據(jù)。微生物鑒定應遵循逐步縮小的原則，用細菌分類學的知識和操作步驟，逐步將未知微生物落實到科、屬、種。 

2 、菌株采集 
從藥品原料、成品檢驗、環(huán)境監(jiān)測和水質檢測過程中，采集菌株。 

3 、菌株純化 
無菌操作用接種環(huán)挑取待鑒定菌落或少許含菌液到相應的培養(yǎng)基上劃線分離，純化培養(yǎng)。

4 、鑒定程序

培養(yǎng)特征 ：菌落形態(tài)，如形狀、大小、色澤、隆起、表面狀況、質地、光澤、水溶性色素等。

細胞形態(tài)：在顯微鏡下，仔細觀察細胞形態(tài) 

形狀：如球狀、桿狀、螺旋狀、弧狀、絲狀及特殊形狀。

大?。褐匾氖羌毎膶挾然蛑睆?。 

排列：單個、成對、成鏈或其他特殊的排列方式。

特殊的細胞結構 
鞭毛：有無鞭毛、著生位置及其數(shù)量。 

芽孢：有無芽孢、形狀、著生位置、孢囊是否膨大。

孢子：孢子形狀、著生位置、數(shù)量及排列。

運動性：鞭毛泳動、滑動、螺旋體運動方式。 

革蘭氏染色反應：呈陽性或陰性

革蘭氏染色試驗 

原理：革蘭氏陽性細菌的細胞壁較厚，細胞壁中的肽聚糖含量高且網(wǎng)格結構緊密，含脂量又低，當用結晶紫復合溶液染色細胞后用脫色劑脫色時，引起了細胞壁肽聚糖層風狀結構的孔徑縮小以至關閉，阻止了結晶紫－碘復合物的逸出，故菌體呈現(xiàn)深紫色；革蘭氏陰性細菌呈現(xiàn)復染液的紅色。 

操作：在潔凈的載玻片上滴一滴蒸餾水或生理鹽水，用接種環(huán)挑取少量菌齡為培養(yǎng)18～24小時的菌苔，涂片經(jīng)火焰固定，加結晶紫染液染1分鐘，水洗干凈；滴加革蘭氏碘液復染1分鐘，水洗，瀝干；滴加95%乙醇脫色，約20～30秒，不時搖動玻片至無紫色為止，水洗；滴加番紅染液復染1～2分鐘，水洗，待干。油鏡檢查。 

陽性－陰性對照控制：取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌懸液，制成涂片，分別染色操作后作為革蘭氏陽性和陰性的對照控制。 
結果判斷：菌體呈藍紫色為革蘭氏陽性菌；菌體呈紅色為革蘭氏陰性菌。

在以下情況必須進行微生物鑒定

新購進標準菌株經(jīng)傳代菌株。

產(chǎn)品檢驗結果超標或出現(xiàn)異常。 

控制菌檢查出現(xiàn)異常時，如有菌生長，不管是否典型菌生長，均需鑒定。

水質檢驗時，微生物檢測結果超過行動限。

環(huán)境監(jiān)測時，微生物檢測結果超過行動限。