1  原理及適用范圍

菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1 mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的微生物檢測項目。菌落總數(shù)檢測板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標準的營養(yǎng)培養(yǎng)基，吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強計數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定。執(zhí)行標準：《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》（GB 4789.2）。

2  操作方法

2.1  樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。

2.2  接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數(shù)檢測板置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內(nèi)，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10s左右，待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。

2.3  培養(yǎng)：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24 h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48 h。

3  結(jié)果判讀

細菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（30～300 CFU）的檢測板進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細菌菌落總數(shù)。

4  附加說明

4.1 菌落總數(shù)檢測板檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達90％以上。

4.2 磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0 g分析純（KH2PO4）溶于500 mL蒸餾水或純凈水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液調(diào)節(jié)PH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1000 mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

4.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5 g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

4.4 注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。