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上海信裕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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當(dāng)您的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)負(fù)值

時(shí)間:2017-9-5閱讀:2730
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當(dāng)您的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)負(fù)值

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)假如按上訴方法處理后查看仍有負(fù)值,則處理數(shù)據(jù)時(shí)可以選用2個(gè)方法:這即是在咱們的說明書中主張查看血清時(shí)做1:2稀釋的要素。
標(biāo)準(zhǔn)曲線只取標(biāo)準(zhǔn)曲線的下面4~5個(gè)點(diǎn),即125,62.5,31.25,15.625,7.8,0,或62.5,31.25,15.625,7.8、3.9、0。
除TGF-B1、sICAM-1、MMP-9、TIMP-1等要做高倍稀釋外,其它一些細(xì)胞因子都要做1:2稀釋(這在咱們的說明書中有提示)。
做法是:先在樣本孔中加50ul試劑稀釋液(試劑盒中已備),再加50ul樣本。
ELISA試劑盒人為的把“0”pg/ml點(diǎn)OD值降低。原則是把“0”OD值降到比zui低的樣本OD略低一點(diǎn),盡可能使樣本的含量滿是正值,一同確保改動(dòng)“0”OD值后的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(r)>0.98。
求出樣本含量后需求乘上稀釋倍數(shù)2。
原則是把樣本的OD值全包括,標(biāo)準(zhǔn)曲線又能至少有4個(gè)點(diǎn)。也即是把標(biāo)準(zhǔn)曲線的下端(即樣本含量會(huì)合的這一段)拓寬,求出的數(shù)據(jù)更可靠。
這么改動(dòng)后,一般樣本都能得到數(shù)據(jù),低的樣本出來了,高的樣本含量也會(huì)高一些。
因?yàn)楹怂銜r(shí)是相對(duì)含量的比照,所以不會(huì)影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)核算效果。
ELISA試劑盒血清中有些細(xì)胞因子的檢出率很低,血清中又富含很多大分子雜蛋白,在血清濃度較高時(shí)簡(jiǎn)略隱秘抗原的表位,因此在測(cè)血清原液經(jīng)常出現(xiàn)負(fù)值。

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