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共聚焦顯微鏡的組成介紹
閱讀：2621 發(fā)布時(shí)間：2020-4-30
共聚焦顯微鏡也叫激光掃描共聚焦顯微鏡，普遍用于熒光成像和細(xì)胞分析，它成像清晰、放大倍數(shù)大、分辨率高，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中強(qiáng)有力的研究工具。共聚焦顯微鏡可以進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)定位、立體結(jié)構(gòu)重組、動(dòng)態(tài)變化過程等研究，并能提供定量熒光測(cè)定、定性圖像分析等研究手段，結(jié)合其他相關(guān)生物技術(shù)，在形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)等分子細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。
共聚焦顯微鏡主要組成包括：顯微鏡、激光光源、掃描裝置、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)系統(tǒng)(包括數(shù)據(jù)采集，處理，轉(zhuǎn)換，應(yīng)用軟件)、圖像輸出設(shè)備、光學(xué)裝置和共聚焦系統(tǒng)。
1、激光器：隨著激光技術(shù)的飛速發(fā)展，共聚焦顯微鏡可以根據(jù)研究需要選擇不同的激光器、如：R-HeNe(633nm)、ArUV(351、364nm)、HeCd(442nm)、AR(458、477、488、514nm)、ArKr(488、568、647nm)、Kr(568nm)、G-HeNe(543nm)、Diode(405nm)等。
2、照明針孔：照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的。激光經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源，相干性好，頻率、振動(dòng)方向、相位高度一致。
3、光束分離器：從樣晶上反射和散射的光與熒光束混合在一起，所以需要用光束分離器將激發(fā)和釋放光束分開。
4、物鏡：選大數(shù)值孔徑平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡為好，有利于熒光的采集以獲得更清晰的成像。
5、焦平面：激光點(diǎn)光源照射標(biāo)本，在焦平面處聚焦，激發(fā)熒光標(biāo)記的樣本發(fā)射熒光，形成焦點(diǎn)光斑。該光斑經(jīng)過物鏡、光束分離器等一系列裝置的處理，分別在照明針孔及探測(cè)器針孔兩處聚焦，共聚焦的含義由此而來。
6、探測(cè)器針孔：起到空間濾波器的作用。大限度地阻礙非聚焦平面散射光和聚焦平面上非焦點(diǎn)斑以外的散射光，以保證探測(cè)器針孔所接受到的熒光信號(hào)全部來自于樣品光斑焦點(diǎn)位置，因此樣品上衍射聚集光斑和探測(cè)器針孔成像光斑包含相同信息。
7、探測(cè)器：用光靈敏度*、響應(yīng)速度極快的電倍增管(PMT)檢測(cè)激發(fā)熒光，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)傳輸至計(jì)算機(jī)，從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像。