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共聚焦顯微鏡的組成介紹

閱讀:2621        發(fā)布時(shí)間:2020-4-30
共聚焦顯微鏡也叫激光掃描共聚焦顯微鏡,普遍用于熒光成像和細(xì)胞分析,它成像清晰、放大倍數(shù)大、分辨率高,是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中強(qiáng)有力的研究工具。共聚焦顯微鏡可以進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)定位、立體結(jié)構(gòu)重組、動(dòng)態(tài)變化過程等研究,并能提供定量熒光測(cè)定、定性圖像分析等研究手段,結(jié)合其他相關(guān)生物技術(shù),在形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)等分子細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。
 
共聚焦顯微鏡主要組成包括:顯微鏡、激光光源、掃描裝置、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)系統(tǒng)(包括數(shù)據(jù)采集,處理,轉(zhuǎn)換,應(yīng)用軟件)、圖像輸出設(shè)備、光學(xué)裝置和共聚焦系統(tǒng)。
 
1、激光器:隨著激光技術(shù)的飛速發(fā)展,共聚焦顯微鏡可以根據(jù)研究需要選擇不同的激光器、如:R-HeNe(633nm)、ArUV(351、364nm)、HeCd(442nm)、AR(458、477、488、514nm)、ArKr(488、568、647nm)、Kr(568nm)、G-HeNe(543nm)、Diode(405nm)等。
 
2、照明針孔:照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的。激光經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源,相干性好,頻率、振動(dòng)方向、相位高度一致。
 
3、光束分離器:從樣晶上反射和散射的光與熒光束混合在一起,所以需要用光束分離器將激發(fā)和釋放光束分開。
 
4、物鏡:選大數(shù)值孔徑平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡為好,有利于熒光的采集以獲得更清晰的成像。
 
5、焦平面:激光點(diǎn)光源照射標(biāo)本,在焦平面處聚焦,激發(fā)熒光標(biāo)記的樣本發(fā)射熒光,形成焦點(diǎn)光斑。該光斑經(jīng)過物鏡、光束分離器等一系列裝置的處理,分別在照明針孔及探測(cè)器針孔兩處聚焦,共聚焦的含義由此而來。
 
6、探測(cè)器針孔:起到空間濾波器的作用。大限度地阻礙非聚焦平面散射光和聚焦平面上非焦點(diǎn)斑以外的散射光,以保證探測(cè)器針孔所接受到的熒光信號(hào)全部來自于樣品光斑焦點(diǎn)位置,因此樣品上衍射聚集光斑和探測(cè)器針孔成像光斑包含相同信息。
 
7、探測(cè)器:用光靈敏度*、響應(yīng)速度極快的電倍增管(PMT)檢測(cè)激發(fā)熒光,轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)傳輸至計(jì)算機(jī),從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像。

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