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激光共聚焦顯微鏡制備樣品時(shí)玻璃片如何處理

閱讀:1334        發(fā)布時(shí)間:2022-7-21
  隨著檢測(cè)設(shè)備的提升、各種顯微技術(shù)的發(fā)展和標(biāo)記手段的提高,如激光共聚焦顯微鏡在生物學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用,使得研究者能夠迅速、準(zhǔn)確地觀察到蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況和定位。
  
  通過(guò)顯微鏡觀察熒光標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和分子,為生物學(xué)的研究提供了更直觀的觀測(cè)手段。因此免疫熒光樣品的制備也成為生物學(xué)研究中的基本技術(shù)方法。
  
  鑒于生物體內(nèi)的復(fù)雜多樣性,制備免疫熒光樣品的方法也存在一些差異。本文主要介紹構(gòu)建綠色熒光融合蛋白表達(dá)載體,并在培養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)綠色熒光融合蛋白及免疫熒光樣品的制備過(guò)程。
  
  將構(gòu)建好的熒光表達(dá)載體進(jìn)行大量擴(kuò)增,并通過(guò)質(zhì)粒抽提試劑盒大量純化,得到不含有內(nèi)毒素的純化質(zhì)粒。將表達(dá)載體導(dǎo)入到培養(yǎng)細(xì)胞中后,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)即可進(jìn)行熒光蛋白的檢測(cè)。而將基因?qū)氩溉閯?dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞的方法有很多種,生化轉(zhuǎn)染法是很常用的導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞方法。
  
  為了方便在激光共聚焦顯微鏡上觀察,免疫熒光樣品通常需要制備在載玻片上。培養(yǎng)的細(xì)胞需要在蓋玻片上貼壁生長(zhǎng)。蓋玻片的厚度應(yīng)小于0.17mm。購(gòu)買(mǎi)到的蓋玻片需要用玻璃洗液浸泡處理一天以上,再用去離子水沖洗掉殘存的洗液。
  
  蓋玻片經(jīng)過(guò)高溫滅菌處理后,放置在細(xì)胞培養(yǎng)皿中,用于培養(yǎng)細(xì)胞。對(duì)于貼壁不牢的細(xì)胞,或者與細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)的研究,玻璃片需預(yù)先包被細(xì)胞外基質(zhì),如poly-L-Lysine,F(xiàn)ibronectin,Laminin等。

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