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技術(shù)文章

骨髓基質(zhì)細(xì)胞固紫B鹽染色法

閱讀:689          發(fā)布時(shí)間:2019-11-12

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  有研究表明,骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)在調(diào)控造血、組織修復(fù)及一些疑難疾病的治療中具有重要意義。然而BMSC并不具備典型形態(tài)特征,且骨髓涂片中數(shù)量甚少,傳統(tǒng)的wright-Giemsa法染色后于普通光鏡下不易識(shí)別。應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞儀、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、熒光標(biāo)記技術(shù)等可將其鑒別,但亦各有其局限性。

  為此,龔旭波等人[1]建立了將固紫B鹽應(yīng)用于BMSC的特異性細(xì)胞化學(xué)染色方法。該方法簡便快速,整個(gè)操作過程僅需30 min,染色明顯,對(duì)陳舊標(biāo)本也易著色,染色液配置后可較長時(shí)間保存,染色結(jié)果保留數(shù)月也不褪色,表明固紫B鹽對(duì)BMSC染色具有較高的穩(wěn)定性、特異性。

 

 

◆實(shí)驗(yàn)步驟

 

1.標(biāo)本采集

  吸取患者骨髓、胸腔積液或腹腔積液50 μL制成涂片。

 

2溶液配制

  固定液:95%乙醇溶液34.5 mL,40%甲醛溶液5.5 mL,蒸餾水1 mL混合而成;

  1 g/L固紫B鹽PBS溶液:50 mg固紫B鹽粉末溶于50 mL PBS溶液,pH 7.2~7.6,4℃下保存;

  蘇木精復(fù)染液:蘇木精2 g溶于250 mL無水乙醇中,硫酸鋁10 g溶于750 mL蒸餾水中,兩種溶液混合后加熱煮沸2 min,再加入0.5 g碘酸鈉和1 g檸檬酸,混勻。

 

3固紫B鹽染色

  上述新鮮干燥標(biāo)本于固定液固定30 s,小水流沖洗后晾干,置入1 g/L固紫B鹽PBS溶液(pH 7.2~7.6),37℃水浴箱內(nèi)置30 min,流水沖洗1 min,晾干后蘇木精復(fù)染2 min,流水沖洗,待干。鏡下觀察細(xì)胞的著色·情況及陽性BMSC形態(tài)特征。

 

 

◆染色效果

 

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051572919561.jpg

圖a~d: 骨髓涂片

a~d圖箭頭所示為骨髓基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)染為紫紅色,胞核不著色,而其他細(xì)胞均無此染色特征(固紫B鹽染色x1000)

 

◆產(chǎn)品列表

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

包裝

060-01081

Fast Violet B Salt
固紫B鹽

Wako Special Grade

1.5 g

 

 

◆相關(guān)產(chǎn)品

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

包裝

052-07221

Ethanol(99.5)
乙醇(99.5)

for Molecular Biology

100 mL

166-23555

PBS(-)
PBS緩沖液

for Cell Culture

500 mL

088-07461

Hematoxylin Monohydrate
蘇木精一水合物

for Cell Staining

5 g

018-09745

Aluminium Sulfate
硫酸鋁

Practical Grade

500 g

190-02252

Sodium Iodate
碘酸鉀

Wako Special Grade

25 g

036-05522

Citric Acid
檸檬酸

Wako Special Grade

25 g

 

 

◆參考文獻(xiàn)

 

[1]龔旭波, 吳先國, 盧興國, 等. 骨髓基質(zhì)細(xì)胞固紫B鹽染色法的建立及其臨床意義[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2008,31(8):890-893.

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